检测分析 食品研究与开：茛 第３２０１１卷第８期 ０年８月 ９５ 油松花粉多糖分离纯化及初步结构鉴定 杨竞 。刘敏ｚ，郭丽梅 （１．承德石油高等专科学校，河北承德０６７０００；２．天津科技大学材料科学与化学工程学院，天津３００４５７） 摘要：采用水提法从油松花粉中提取多糖，用ＤＥＡＥ一纤维素５２柱色谱和Ｓｅｐｈａｅｒｙｌ Ｓ－２００凝胶柱色谱进行分离纯 化，获得２种均一组分Ｄ。。和Ｄ 经过Ｓｅｐｈａｅｒｙｌ Ｓ－３００凝胶柱色谱进行纯度鉴定，表明Ｄ－。和Ｄ３一是均一多糖，用凝胶 过滤法测定Ｄ 分子量为７６４６８ｕ，紫外光谱证明Ｄ 不合蛋白质，红外光谱表明Ｄ 中含有多糖类物质的特征吸收峰。 关键词：油松花粉；多糖；分离；纯化 Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｆｒｏｍ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｉｎｅ Ｐｏｌｌｅｎ ＹＡＮＧ Ｊｉｎｇ ，ＬＩＵ Ｍｉｎ２，ＧＵＯ Ｌｉ—ｍｅｉ （１．Ｃｈｅｎｇｄｅ Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｃｈｅｎｇｄｅ ０６７０００，Ｈｅｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ；２．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍａｔｅｒｉａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｔｉａｎｊｉｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ ３００４５７，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｃｈｉｎｅｓｅ ｐｉｎｅ ｐｏｌｌｅｎ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｐｉｎｅ ｐｏｌｌｅｎ ｗｉｔｈ ｗａｔｅｒ，ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｎｄ ｐｕｒｉｉｆｅｄ ｂｙ ＤＥＡＥ ｉｏｎ—ｅｘｃｈａｎｇｅ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ａｎｄ Ｓｅｐｈａｅｒｙｌ Ｓ－２００ ｇｅｌ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，Ｄｌ１ ａｎｄ Ｄ３１ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ． Ｔｈｅ ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｓｅｐｈａｅｒｙｌ Ｓ－３００ ｇｅｌ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｉｍｐｌｉｅｄ ｔｈａｔ Ｄｎ ａｎｄ Ｄ３１ ｗｅｒｅ ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ ｐｏｌｙｓａｅｃｈａｒｉｄｅｓ．Ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ Ｄ１１ ｗａｓ ７６ ４６８ Ｕ，ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ ｂｙ ｇｅｌ ｉｆｌｔｒａｔｉｏｎ．Ｎｏ ｔｙｐｉｃａｌ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ Ｄｎ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｉｎ ＵＶ ｓｐｅｃｔｒｕｍ．Ｉｎｆｒａｒｅｄ ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ Ｄ１１ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｉｔｓ ｈａｄ ｔｙｐｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｐｅａｋｓ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｃｈｉｎｅｓｅ ｐｉｎｅ ｐｏｌｌｅｎ；ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ；ｉｓｏｌａｔｉｏｎ；ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ 油松花粉营养丰富、全面，含多种维生素、蛋白 其他试剂为分析纯，市售。 质、氨基酸，不饱和脂肪酸，单糖，多糖，黄酮，核酸，膳 ＲＥ一５２ＡＡ型旋仪器蒸发器：上海亚荣生化仪器 食纤维等营养物质，被称“花粉之王”㈣。其中多糖含 厂；透析袋ＭＤ３４（分子截流量为３ ５００）：ＵＳ Ｓｏｌａｒｂｉｏ公 量丰富，含量达１．２％～２．５％嗍。目前国内外药理学研究 司；ＳＰ一２１０２ＵＶ紫外可见分光光度计：上海光谱仪器 证明松花粉能增强机体免疫力、抗肿瘤、抗衰老、降血 厂；层析柱１．６ｘ５０ ｃｍ：上海华美实验厂；傅里叶变换红 脂、降血糖等作用，而这些作用与松花粉多糖有着密切 外光谱仪ＷＱＦ一５２０：北京第二光学仪器厂。 关系。热水浸提油松花粉，得到了其中的非淀粉类多 １．２方法 糖，经过分离纯化得到其中的主要成分，并对其进行初 １．２．１水提取 步的结构分析，为进一步深入研究其生理活性及作用 取一定量经破壁脱脂、酒精浸提处理的油松花 机理奠定基础。 粉，按料液￣Ｅ（ｇ／ｍＬ）１：１０加水，６０ ｃ【＝下提取。离心，合 并上清液，减压浓缩，加入４倍量的９５％乙醇过夜沉 １材料与方法 淀，离心取沉淀，用无水乙醇、丙酮洗涤，得油松花粉粗 １．１材料和仪器 多糖。 油松花粉：河北承德畅达天然营养品有限公司提 １．２．２水提多糖的分离纯化 供；ＤＥＡＥ一５２纤维素，Ｓｅｐｈａｅｒｙｌ Ｓ一２００，Ｓｅｐｈａｅｒｙｌ Ｓ一 将油松花粉粗多糖溶于水，用１０％三氯乙酸 ３００，蓝色葡聚糖，标准系列多糖ＤｅｘＴｒａｎ（Ｔ一１０，Ｔ一４０， （ＴＣＡ）除蛋白，剧烈振荡，离心收集上清液，减压浓缩， Ｔ＿７０，Ｔ－２００）Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ—ＣＬ一６Ｂ：瑞典Ｐｈａｒｍａｅｉａ公司； 重复操作直至不再产生白色沉淀。然后取多糖浓缩液 作者简介：杨竞（１９６８一），男（汉），工程师，本科，学士，研究方向：从 流水透析４８ ｈ，减压浓缩，加入４倍量的９５％乙醇过 事化学教育及实践教学工作。 夜沉淀，离心取沉淀，用无水乙醇、丙酮洗涤，得油松花 ３１ ８ 第 卷第期 ’食品研究与开发 艮明町 司’１ｒ及 检测分析 粉精制多糖。先用ＤＥＡＥ一纤维素５２柱进行初步分离， 分离组分再用Ｓｅｐｈａｅｒｙｌ Ｓ一２００柱进一步细分。 １．２．３分析与鉴定方法 １）纯度鉴定采用Ｓｅｐｈａｅｒｙｌ Ｓ－３００凝胶色谱柱色 谱鉴定油松花粉多糖纯化组分。 ２）分子量测定采用凝胶过滤法测定［５－．６１。 ３）光谱分析分别对样品进行紫外光谱和红外图 谱鉴定。 ２结果与讨论 ２．１油松花粉多糖经ＤＥＡＥ￣２纤维素柱初步纯化结果 取２ｏ０，ｍｇ油松花粉精制多糖配成２ ｍＬ上样液， 将上样液加入装填好的ＤＥＡＥ一纤维素５２（１．６ｘ５０ ｃｍ） 柱，依次用蒸馏水、０．１、０．３、０．５ ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣ１溶液进行洗 脱，洗脱速度０．６ ｍＬ／ｍｉｎ，每４ ｍＬ收集１管洗脱液。用 苯酚一硫酸法（４８３ ｎｍ）隔管测定其中的多糖含量，更换 洗脱液前直至洗脱液没有多糖检出为止。以吸光度 为纵坐标，绘制多糖的洗脱曲线，其洗脱曲线如图１越 所示。 ２．５ ２．Ｏ １．５ 米 １．０ Ｏ．５ ０ ０ ｌＤ ２Ｏ ３０ ４０ ５０ ６０ ７０ ８０ ９０ ｌＵＵ ｌｌ０ ｌ２０ 管数 图１ ＤＥＡＥ一纤维素５２柱层析分离结果 Ｆｉｇ．１ Ｅｌｕｔｉｏｎ ｃｌａｖｅ ｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｗｉｔｈＤＥＡＥ－－Ｃｅｉｌｕｌｏｓｅ ５２ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｅｌｕａｎｔ 由图１可以看出，经过蒸馏水、０．１、０．３、０．５ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣ１溶液分步洗脱多糖溶液各得到１个洗脱峰。出峰 峰型对称，明显，表明ＤＥＡＥ一５２纤维素柱对多糖起到 了很好的分离效果。将这４个洗脱峰分别依次命名为 Ｄ 、Ｄ 、Ｄ 和Ｄ 。合并洗脱峰各管洗脱液，旋转蒸发浓 缩，透析后干燥。 ２．２ Ｄ１与Ｄ３过Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－２００柱进一步纯化结果 经ＤＥＡＥ一纤维素５２柱初步分离的多糖组分Ｄ。、 Ｄ 再经Ｓｅｐｈａｅｒｙｌ Ｓ－２００柱进一步细分，用蒸馏水洗 脱，洗脱速度０．６ ｍＬ／ｍｉｎ，每４ ｍＬ收集１管洗脱液，用 苯酚一硫酸法隔管测定其中的多糖含量。以吸光度为 纵坐标，绘制多糖的洗脱曲线，其洗脱曲线如图２、图３ 所示。 由图２、图３，发现多糖Ｄ 、Ｄ３只出现一个洗脱峰， 因而Ｄ 、Ｄ，均只含有一个组分，命名为Ｄ 、Ｄ，。进行下 管数 图２ Ｄｌ经Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－２００凝胶洗脱曲线 Ｆｉｇ．２ Ｅｌｕｔｉｏｎ ｃｒｕｖｅ ｏｆ Ｄｌ ｗｉｔｈ Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－２００ＨＲ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｅｌｕａｎｔ ０ 管数 图３ Ｄ３经Ｓｅｐｈａｃｒｙｉ Ｓ－２００凝胶洗脱曲线 越 Ｆｉｇ．３ Ｅｌｕｔｉｏｎ ｃｒｕｖｅ ｏｆ Ｄ３ ｗｉｔｈ Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－２００ＨＲ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｅｌｕａｎｔ 一步的纯度鉴定，合并洗脱峰各管洗脱液，旋转蒸发浓 缩，透析后干燥。 ２．３ Ｄ 与Ｉ）３ 的纯度鉴定 取样品Ｄ， 、Ｄ， 各１０ ｍｇ，溶于最小体积的蒸馏水 中，分别上Ｓｅｐｈａｅｒｙｌ Ｓ－３００凝胶柱，用蒸馏水洗脱，流 速０．２５ ｍＬ／ｍｉｎ，每２ ｍＬ收集１管洗脱液，用苯酚一硫 酸法隔管测定其中的多糖含量。以吸光度为纵坐标， 绘制多糖的洗脱曲线，其洗脱曲线如图４、５所示。 １．６ １．４ １．２ １．Ｏ Ｏ－８ Ｏ．６ Ｏ．４ ０．２ ０ Ｏ １Ｏ ２Ｏ ３０ ４０ ５０ 管数 图４ ＤＩｌ经Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－３００凝胶洗脱曲线 Ｆｉｇ．４ Ｅｉｕｔｉｏｎ ｃｇｕｖｅ ｏｆ ＤＩ１ ｗｉｔｌｌ Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ一３００ＨＲ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｅｌｕａｎｔ 由图４、图５，看出多糖组分Ｄ１ 、Ｄ３ｌ经过ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ一 ３００柱层析后发现只有一个的洗脱峰，且峰型对称，可 以初为Ｄ 。、Ｄ，。均为均一的多糖组分。 ２．４均一组分Ｄ１１分子量测定 装填Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ—ＣＬ－６Ｂ柱，用蒸馏水平衡２４ ｈ。用 蓝葡聚糖（Ｍｗ＞２ ０００ ０００），５００Ｏ００（Ｔ一１５０），７００００（Ｔ一 ７０），４０ Ｏ００（Ｔ－－４０），１０ ０００（Ｔ一１０）的ＤｅｘＴｒａｎ标准品各 检测分析 食品研究与开发 第３２０１０年８月卷第８期 ０ ５ １Ｏ １５ ２Ｏ ２５ ３Ｏ ３５ 管数 图５ Ｉ），ｌ经ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－３００凝胶洗脱曲线 Ｆｉｇ．５ Ｅｌｕｆｉｏｎ ｃｒｕｖｅ ｏｆ ＤＭ ｗｉｔｈ Ｓｅｐｈａｃｒｙｉ Ｓ－３００ＨＲ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｅｌｕａｎｔ １ ｍｇ，溶于０．５ ｍＬ蒸馏水洗脱液中，分别上柱，洗脱， 洗脱速度为０．２ ｍＬ／ｍｉｎ，每１０ ｍｉｎ收集一管，用苯酚一 硫酸法显色隔管测其中的多糖含量绘制洗脱曲线。蓝 色葡聚糖洗脱的外水体积为 ｏ。测定各自的洗脱体 积 ｅ，根据公式Ｖｅ／Ｖｏ＝Ｋ ＋Ｋ２１ｇＭｗ得回归方程ｙ＝ ——０．７８１ ８ｘ＋５．４１４ ４（Ｒ２＝０９７９ ６ ｏ 称取１ ｍｇ样品溶于０．５ ｍＬ的蒸馏水中，上柱，洗 脱，分部收集，用苯酚一硫酸法澳９定每管中的多糖含 量，得到洗脱曲线及洗脱体积（Ｖｅ）。将 ｅ代入分子量 回归方程中，即可推算出多糖纯化组分的分子量，结 果见表１。 表１标准葡聚糖及样品Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－ＣＬ－－６Ｂ柱层析结果 Ｔａｂｌｅ １ Ｅｉｕｔｉｏｎ ｖｏｌｕｍｅ ｏｆ ＤｅｘＴｒａｎ（Ｔ－１０。Ｔ．－４Ｏ。Ｔ．－７０。Ｔ－２００）ａｎｄ Ｄｌｌ ｔｈ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－－ＣＬ－６Ｂ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｅｌｕａｎｔ 经蓝色葡聚糖洗脱的外水体积 。为１８ ｍＬ。 ２．５油松花粉多糖的紫外光谱扫描结果 将未除蛋白的油松花粉粗多糖溶液与多糖溶液 Ｄ。。在２００ ａｍ～６００ ｎｍ范围内进行紫外分光扫描。得到 图６和图７。 一＿Ｉ一一ｒ一１一一广一１…ｒ一一＿Ｔ一一Ｉ ｌ ｌ ｌｌ ｌ ｉ ｌＩ ｌ ｝ Ｉ｝ ｌ Ｉ ＩＩ 一一…Ｌ—Ｊ一一Ｌ一－土一一Ｌ＿一＿圭一一ｌ Ｉ Ｉ ＩＩ Ｉ ｌ ｌｌ Ｉ Ｉ ＩＩ Ｉ Ｉ ｌｌ Ｉ Ｉ ＩＩ Ｉ Ｉ ｌｌ 厂］一一厂一－Ｔ一一厂一１一一广一－Ｔ一一ｌ Ｉ ｌ Ｉ ｌｌ Ｊ ｌ Ｉｆ Ｌ— 一一ｌ—ｊ一一 — 一一 Ｉ ＼ ｌ ｊ Ｉ Ｉ ｉ Ｉ Ｉ Ｉ ＼Ｉ Ｉ ｌ Ｉ ｌ ＩＩ 波长／ｎｍ 图６未除蛋白的油松花粉多糖ＵＶ扫描图 Ｆｉｇ．６ Ｔｈｅ ＵＶ ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｏｆ ｃｒｕｄｅ ｐｏｌｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ９７＝＝＝一 波长／ｎｍ 图７ Ｄ。 的ｕＶ扫描图 Ｆｉｇ．７ ＴｈｅＵＶ ｓｐｅｃｔｕｒｍ ｏｆＤｌｌ 如图６与图７所示，脱蛋白前的粗多糖在２６０ ｎｍ～ ２８０ ｎｍ处有明显的蛋白特征吸收蜂，证明了粗多糖中 含有蛋白，而精制并纯化后多糖Ｄ 在２６０ ａｍ～２８０ ｎｍ 处没有特征吸收峰，但是曲线在２６０ ｎｍ～２８０ ｎｍ处不 是非常平滑，可能是多糖中还含有极少量的与糖相结 合的蛋白。 一－Ｌ 一 黾ｌ１１暑岛∞ ２．６油松花粉多糖的红外光谱分析结果 称取样品量为２．０ ｍｇ，与２００ ｍｇ干燥的ＫＢｒ研 磨，压片。用傅里叶变换红外光谱仪在４００ ｃｍ～～ ４ ０００ ｃｍ一１区内进行红外区扫描，得到图８。 Ｗａｖｅｎｕｍｂｅｒ／ｃｍ一 仪器型号＝ＷＱＦ一５２０分辨率＝４扫描次数＝３２ ２００９／５／２５ １０：３９精 制多糖２４４．ＡＳＦ 图８油松花粉多糖Ｄ．．的ｍ扫描图 Ｆｉｇ．８ Ｔｈｅ ｌｉｔ ｓｐｅｃｔｒａ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｐｉｎｅ ｐｏｌｌｅｎ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ Ｄｌｌ 由图８可知，红外光谱在３ ３６７ ｃｍ 处出现强宽 峰，为糖Ｏ－Ｈ伸缩振动的强吸收，２９２５ ｃｍ－ 与１ ４１９ｃｍ 两组特征吸收峰代表了Ｃ—Ｈ的伸缩振动和弯曲振动， 和１ ２３６ ｃｍ 处两组较弱的峰为Ｃ—Ｈ的，１ ６４７ ｃｍ 段 吸收峰为碳一氧双键伸缩振动，１ ０７８ ｃｍ 和１ ０３６ ｃｍ 段出现的２组较强的吸收峰为Ｃ—Ｏ—Ｈ或者Ｃ—Ｏ—Ｃ的 伸缩振动，７６６ ｃｍ 处出的峰为 一吡喃糖环的伸缩振 动，这些均为多糖的的特征吸收峰。 ３结论 采用水提法提取油松花粉多糖，经ＤＥＡＥ一纤维素 ５２和Ｓｅｐｈａｅｒｙｌ Ｓ－２００柱层析分离纯化得多糖组分 ２０１０年８月 第３１卷第８期 食品研究与开发 检测分析 ＨＰＬＣ法测定绿豆芽中四种大豆异黄酮的含量 周光明，李艳艳，辛丹敏 （发光与实时分析教育部重点实验室，西南大学化学化工学院，重庆４００７１５） 摘要：建立同时测定绿豆芽中４种大豆异酮（大豆苷、染料木苷、大豆苷元和染料木素）含量的高效液相色谱方法． 对从绿豆芽中提取４种大豆异黄酮的工艺进行优化，最佳工艺为：用６ｏ％的乙醇在５５℃条件下超声提取６０ ｍｉｎ， 料液比为ｌ：１２（ｇ／ｍＬ），同时探究绿豆发芽不同天数４种大豆异黄酮的含量。采用日本岛津ＬＣ一２０Ａ高效液相色谱仪 进行测定的色谱条件为：色谱柱为ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｃ。 （１５０ ｍｍｘ４．６ ｍｍ，５．０ ｍ），采用乙腈一０．２％甲酸为流动相进行梯度 洗脱，流速为０．８ ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长为２６０ ｎｍ。大豆苷，染料木苷，大豆苷元，染料木素的线性范围分别是 ０．７４￣ｇ／ｍＬ－－１００．００ 咖Ｌ，０．７４ 咖Ｌ一２ｏｏ．Ｏ０ Ｉｘｇ／ｍＬ，０．１６７ Ｉ￣ｇ／ｍＬ￣５００．Ｏ０ Ｉｘｇ／ｍＬ，０．１９８ Ｉ￣ｇ／ｍＬ￣１６０．Ｏ０ Ｉｘｇ／ｍＬ（ｒ＞０．９９９ ６）， 线性关系良好；加样回收率（ｎ＝９）分别为１００．０２％，９８．９５％，９９．２８％，９９．６３％。 关键词：ＨＰＬＣ；绿豆芽；大豆异黄酮；正交试验 Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｏｕｒ Ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ ｉｎ Ｍｕｎｇ Ｂｅａｎ Ｓｐｒｏｕｔ ｂｙ ＨＰＬＣ ＺＨＯＵ Ｇｕａｎｇ—ｍｉｎｇ，ＬＩ Ｙａｎ—ｙａｎ，ＸＩＮ Ｄａｎ—ｒａｉｎ （Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｎ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ａｎｄ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ（Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ），Ｍｉｎｉｓｔｙｒ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｙｒ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ４００７ １ ５，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ ｄｅｖｅｌｏｐ ａｎ ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｏｕｒ ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅｓ，ｄａｉｄｚｉｎ，ｇｅｎｉｓｔｉｎ，ｄａｉｄｚｅｉｎ， ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ ｉｎ ｍｕｎｇ ｂｅａｎ ｓｐｒｏｕｔ．Ａｎ ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｃｌ８ ｃｏｌｕｍｎ（１５０ ｍｍｘ４．６ ｍｍ，５．０ Ｉｘｍ）ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ，ａ ｇｒａｄｉｅｎｔ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｃｏｍｐｏｓｉｎｇ ｏｆ ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ ａｎｄ ０．２％ｆｏｒｍｉｃ ａｃｉｄ ｗａｓ ｕｓｅｄ，ａｎｄ ｔｈｅ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｗａｓ ０．８ ｍＬ／ｍｉｎ， ｄｅｔｅｃｔｉｖｅ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ｓｅｔ ａｔ ２６０ ａｍ．Ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｏｕｒ ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅｓ ｏｆ ｍｕｎｇ ｂｅａｎ ｓｐｒｏｕｔ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ，ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｗａｓ ｔｈｅ ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ６０％，５５ ｏＣ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ６０ ｒａｉｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｓｏｌｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ １：１２（ｇ／ｍＬ）．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｔｈａｔ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ ｏｆ ｆｏｕｒ ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅｓ ｗａｓ ０．７４ ｌｘｇ／ｍＬ－１００．００ Ｉ．Ｌｇ／ｍＬ，０．７４ Ｉｘｇ／ｍＬ－２００．００ Ｉｘｇ／ｍＬ，０．１６７ Ｉｘｇ／ｍＬ－５００．００ Ｉ－￣ｇ／ｍＬ， ０．１９８￣ｇ／ｍＬ－１６０．Ｏ０ Ｉｘｇ／ｍＬ（ｒ＞Ｏ．９９９ ６）ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ａｎｄ ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ（ｎ＝９）ｗｅｒｅ １００．０２％，９８．９５％， ９９．２８％，９９．６３％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ａ ｓｐｅｃｉｆｉｃ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｏｕｒ ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅｓ ｉｎ ｍｕｎｇ ｂｅａｎ ｓｐｒｏｕｔ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ＨＰＬＣ；ｍｕｎｇ ｂｅａｎ ｓｐｒｏｕｔ；ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ；ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ 基金项目：发光与实时分析重庆市重点实验室（西南大学）（ＣＳＴＣ，２００６ＣＡ８００６）；西南大学校青年基金（ＳＷＮＵＱ，２００５００８）；重庆市自然科学基 金（ＣＳＴＣ。２００７ＢＢ５３７０） 作者简介：周光明（１９６４一），男（汉），教授，博士，主要从事色谱方面的研究。 Ｄ 、Ｄ， ，并对其进行纯度鉴定，通过Ｓｅｐｈａｅｒｙｌ Ｓ－３００凝 ［３】鲍善芬，丛涛．松花粉抗氧化性的体外实验研究［Ｊ】＿营养学报， 胶柱层析，Ｄ 。、Ｄ，。均为均一的多糖组分，测得Ｄ 分子 ２００５，２７（６）：４８７－４９０ 量为７６ ４６８ Ｕ。光谱分析表明，油松花粉多糖组分Ｄ ［４］石丽花，尹利端．松花粉作为保健食品的优势和特点［Ｊ】．农业工 程技术：农场品加工，２００８（１）：２０—２４ 不含蛋白质，并且含有多糖类物质的特征吸收峰。 【５】赵永芳．生物化学技术原理及其应用［Ｍ］．武汉：武汉大学出版社， １９９４：２３１－２４９ 参考文献： 【６］Ｒｏｎｇｍｉｎ Ｙｕａ，Ｌｅｉ Ｗａｎｇ，Ｈｕｉ Ｚｈａｎｇ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ 【１】孙蕾，顾春丽，房用，等．赤松和黑松花粉的营养成分测定及功能 ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｅｈａｒｉｄｅｓ ｅｕｈｕｒｅｄ Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｍｉｌｉｔａｒｉｓ［Ｊ］． 分析 ．山东大学学报：理学版，２００６，４１（１）：１３０－１３２ Ｆｉｔｏｔｅｒａｐｉａ，２００４，Ｖｏ１．７５（７）：６６２—６６６ 【２］耿越，刘辉，石丽花，等．破壁马尾松花粉的成分分析研究［Ｊ】．中 国野生植物资源，２００６，２５（５）：５７—５８ 收稿日期：２０１０－０６—１６
