实验二 TLC法进行药物中特殊杂质的检查
一、目的要求
1、掌握阿司匹林片、盐酸哌唑嗪中特殊杂质检查的基本原理和方法。 2、掌握薄层色谱在药物杂质检查中的应用。 3、掌握薄层色谱法的基本操作。 二、乙酰水杨酸中游离水杨酸的检查
取本品0.1克，加乙醇1mL溶解后， 加冷水适量使成50mL，立即加新制的稀硫酸铁铵溶液（取盐酸溶液（9→100mL）1mL，加硫酸铁铵指示液2mL后，再加水适量使成100mL）1mL，摇匀，30秒钟内，如显色。与对照液（精密称取水杨酸0.1克，加水溶解后，加冰醋酸1mL，摇匀，再加水使成1000mL，摇匀。精密量取1mL，加乙醇1mL，水48mL，与上述新制的稀硫酸铁铵溶液1mL，摇匀）比较。不得更深（0.1%）。 三、盐酸哌唑嗪中有关物质检查 1.薄层板的制备
取硅胶GF254硅胶4g，加水约12mL，（1份固定相和3份水）在研钵中按同一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为 0.2～0.3mm），取下涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干后，在 110℃活化 30 分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。 2.盐酸哌唑嗪中有关物质检查
取本品，加三氯甲烷-甲醇-二乙胺（10︰10︰1）溶液制成每1mL中含5.0mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加同一溶液稀释成每1mL中含50μg的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法（附录V B）试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-二乙胺（95︰5)为展开剂；展开，晾干，置紫外灯（254nm）下检视。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。 四、注意事项
1.点样采用微量注射器进行，在距薄层板底边2.5cm处开始点样，应少量多次点于同一原点处，原点面积应尽量小。
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2.采用倾斜上行法展开，展开剂应浸入薄层板底边的1cm深度。
3.碱性四氮唑蓝试液应临用新配，新鲜试剂应呈黄色，颜色如变深者不宜使用。 4.显色后，应立即检视斑点，并用针头定位，以便记录图谱
5.游离水杨酸的检查，样品管应尽量干燥，不得带入过多水分，否则样品加醇后不易溶解。 五、思考题
1.薄层层析法检查盐酸哌唑嗪中有关物质与氢化可地松中其他甾体的原理是什么？为何用稀释液作对照品？ 2.试计算三种药物的杂质限度？
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实验二 药物特殊杂质检查 一、原始记录
检查项目 乙酰水杨酸中游离水杨酸的检查 盐酸哌唑嗪中有关物质检查 检 测 方 法 现 象 观 察 杂 质 限 量 结 果
①附薄层层析板图谱 ②列式计算杂质限量 二、实验报告
检品名称： 乙酰水杨酸 盐酸哌唑嗪 醋酸可的松
化验目的：特殊杂质检查 游离水杨酸 有关物质 其他甾体 化验方法：按中国药典P283 P543 2000年版 化验结果： 〈0.1% 合格
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