免疫抑制剂姜黄素逆转胰岛素抵抗的研究

维普资讯 http://www.cqvip.com 第２８卷　第５期　２００７矩　中山大学学报（医学科学版）　Ｖ０１．２８　Ｎｏ．５　９月　ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＳＵＮ　ＹＡＴ—ＳＥＮ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ（ＭＥＤＩＣＡＬ　ＳＣＩＥＮＣＥＳ）　Ｓｅｐ．　２００７　・基础研究・　免疫抑制剂姜黄素逆转胰岛素抵抗的研究　郭颖，高毅，刘永光　（南方医科大学珠江医院器官移植科，广东广州　５１０２８２）　摘要：【目的】为探讨姜黄素（ｃｕｒｃｕｍｉｎ）对胰岛素抵抗的治疗作用及其机制。【方法】利用胰岛素抵抗的小　鼠模型，观察姜黄素对小鼠胰岛素抵抗的水平、转录因子Ｉ－ＫＢｏｔ、循环细胞因子的变化。【结果】①姜黄素能抑制　ＴＮＦｏｔ刺激Ｆａｏ细胞ＮＦ—ＫＢ激活；②姜黄素治疗后小鼠的空腹血糖水平没有明显下降，但空腹胰岛素的水平下　降约３０％，葡萄糖耐量曲线的水平也明显下降；③循环中ＴＮＦ０【［（３４．５＋３．４）ｐｇ／ｍＬ　ＶＳ（３１．３＋１．１）ｐｇ／ｍＬ］水平没有　明显改变，而ＩＬ一１Ｂ［（３３．９＋３．２）ｐｇ／ｍＬ　ＶＳ（１５．６＋１．１）ｐｇ／ｍＬ］和ＩＬ－６［（７２．１＋９．８）ｐｇ／ｍＬ　ＶＳ（４７．２＋５．３）ｐｇ／ｍＬ］水平　明显被抑制；④胰岛素刺激的ＩＲＳ一１酪氨酸的磷酸化水平明显升高，而胰岛素受体的磷酸化水平没有明显改变。　与ＩＲＳ一１酪氨酸的磷酸化水平平行，Ｐ８５的磷酸化水平也明显升高，ＡＫＴ的磷酸化的水平也明显升高。【结论】　姜黄素能提高小鼠胰岛素敏感性，有治疗改善肥胖诱导的胰岛素抵抗的作用。　关键词：姜黄素；ＮＦ—ＫＢ；胰岛素；抵抗　中图分类号：Ｒ３０２．１　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７２—３５５４ｌ２００７）０５—０４８１—０４　Ｉｍｍｕｎｅ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　Ｃｕｒｃｕｍｉｎ　Ｒｅｖｅｒｓｅｓ　Ｉｎｓｕｌｉｎ　Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ＧＵＯ　Ｙｉｎｇ，ＧＡＯ　Ｙｉ，ＬＩＵ　Ｙｏｎｇ－ｇｕａｎｇ　（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｏｒｇａｎｓ　Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，Ｚｈｕｊｉａｎｇ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｎａｎｆａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５１０２８２，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：　【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｃｕｒｃｕｍｉｎ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｎ　ｉｎｓｕｌｉｎ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．　【Ｍｅｔｈｏｄｓ】Ｃｕｒｃｕｍｉｎ　ｃｏ－ｏｐｅｒａｔｅｄ　ｈｉｇｈ　ｆａｔ　ｄｉｅｔｓ　ｗｅｒｅ　ｔｅｓｔｅｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｃｕｒｃｕｍｉｎ　ｏｎ　ｏｂｅｓｉｔｙ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｉｎｓｕｌｉｎ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｉｎ　ｒｏｄｅｎｔ　ｍｏｄｅ１．Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ　Ｉ　ａｎｄ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ　ｗｅｒｅ　ａｌｓｏ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ａｆｔｅｒ　ｃｕｒｃｕｍｉｎ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．【Ｒｅｓｕｌｔｓ】（１）Ｃｕｒｃｕｍｉｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ＴＮＦｏｔ—ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ＮＦ—ＫＢ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｆａｏ　ｃｅｌｌｓ．（２）Ｔｈｅ　ｆａｓｔｉｎｇ　ｐｌａｓｍａ　ｇｌｕｃｏｓｅ　ｌｅｖｅｌ　ｗａｓ　ｎｏｔ　ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ａｆｔｅｒ　ｔｈｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｃｕｒｃｕｍｉｎ，ｂｕｔ　ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ｆｓｔａｉｎｇ　ｉｎｓｕｌｉｎ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｂｙ　ａｂｏｕｔ　３０％．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ，ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ｇｌｕｃｏｓｅ　ｔｏｌｅｒａｎｃｅ　ｃｕｒｖｅ　ｄｒｏｐｐｅｄ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ．（３）Ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ＴＮＦｏｔ［（３４．５＋３．４）　ｐｇ／ｍＬ　ＶＳ（３１．３＋１．１）ｐｇ／ｍＬ］ｉｎ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ　Ｗａｓ　ｎｏｔ　ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ　ｃｈａｎｇｅｄ，ｂｕｔ　ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ＩＬ一１Ｂ【（３３．９＋３．２）ｐｇ／ｍＬ　ＶＳ　（１５．６＋１．１）ｐｇ／ｍＬ］ａｎｄ　ＩＬ一６【（７２．１＋９．８）ｐｇ／ｍＬ　ＶＳ（４７．２＋５．３）ｐｇ／ｍＬ］ｗａｓ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄ　ｄｒａｍａｔｉｃａｌｌｙ．（４）ＩＲＳ一１　ｔｙｒｏｓｉｎｅ　ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　ｉｎｓｕｌｉｎ　ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ｂｕｔ　ｔｈｅ　ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ｉｎｓｕｌｉｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｄｉｄ　ｎｏｔ　ｃｈａｎｇｅ．Ｂｅｉｎｇ　ｐａｒａｌｌｅｌ　ｗｉｔｈ　ｔｙｒｏｓｉｎｅ　ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ＩＲＳ一１，ｔｈｅ　ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　Ｐ８５　ａｎｄ　ＡＫＴ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ａｃｃｏｒｄｉｎｇｌｙ．Ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　ｉｎｓｕｌｉｎ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　Ｗａｓ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｉｎ　ｇｒｏｕｐｓ　ｗｉｈｔ　ｃｕｒｃｕｍｉｎ．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】　Ｃｕｒｃｕｍｉｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｓ　ＮＦ－ＫＢ　ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｐａｔｈｗａｙ　ａｎｄ　ｒｅｖｅｒｓｅｓ　ｏｂｅｓｉｔｙ—ｉｎｄｕｃｅｄ　ｉｎｓｕｌｉｎ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｃｕｒｃｕｍｉｎ，ＮＦ－ＫＢ，ｉｎｓｕｌｉｎ，ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｆＪ　ＳＵＮ　Ｙａｔ－ｓｅｎ　Ｕｎｉｖ（Ｍｅｄ　Ｓｅｉ），２００７，２８（５）：４８ｌ＿４８４】　姜黄（ＣｕｒｃｕｒｅａｌｏｎｇａＬ．）是常用中药，ｌ临床上用　于活血、行气、通经、止痛。姜黄素（ｃｕｒｃｕｍｉｎ）是一种　黄色色素。从姜黄中提取得到的主要有效成分。近　年来。大量研究发现它具有免疫调节、抗氧化、抗炎　在实验室资料中姜黄素是良好的免疫调节剂，并有　结果提示姜黄素可以抑制宿主抗移植物反应，而且　提高受体动物的存活率Ｉ５一。在实验研究中，炎症又　与胰岛素抵抗密切相关［’．８］。炎症被证实是代谢综　合征的共同土壤，联想到许多抗炎药物如阿司匹林　及抗肿瘤、抗动脉粥样硬化等生理和药理作用［　。　收稿日期：２００７—０３—１８　基金项目：国家重点基础研究发展计划项目（９７３项目，２ｏｏ６ＣＢ９５０３９ｏ０）　作者简介：郭颖（１９６３一）。女，安徽宿州市人，副教授，副主任医师，主要从事免疫抑制剂与胰岛素抵抗的临床和实验研究，Ｅ－ｍａｉｌ　ｇｕｏｈａｎｊｉｎｇＯ０１＠１６３．ＣＯＩｌ１．　维普资讯 http://www.cqvip.com

４８２　中山大学学报（医学科学版）　第２８卷　可以逆转胰岛素抵抗，本文尝试利用姜黄素治疗肥　胖合并极度胰岛素抵抗的炎症模型，并对姜黄素逆　转胰岛素抵抗的机制作初步探讨。　１材料与方法　１．１　材　料　１．１．１姜黄素购于印度亚洲公司（纯度９９％）。　１．１．２动物Ｏｂｏｂ雄性小鼠１６只，８周龄、空腹体　质量（３３～３８　ｇ），购自南京国家模式动物中心，用含　脂肪６．４％的标准饲料饲养，实验前１周纪录小鼠　的饲料摄取、空腹血糖、空腹胰岛素水平及体量等。　１．１．３　ＦＡＯ细胞　购自Ｔｈｅ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）。　１．１．４试剂　ＩＲ、ＩＲＳ一１、ＡＫＴ、Ｐ８５多克隆抗体由　Ｓｔｅｖｅｎ　Ｓｈｏｅｌｓｏｎ实验室（Ｊｏｓｌｉｎ　Ｄｉａｂｅｔｅｓ　Ｃｅｎｔｅｒ，　Ｈａｒｖａｒｄ）提供。ＦＢＳ　ＴＮＦｃｔ、胰岛素购自Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．　Ｌｏｕｉｓ　ＵＳＡ，Ｉ—ＫＢｏｔ抗体，ＩＫＫ￣／抗体，购于Ｓａｎｔａ　Ｃｒｕｚ，　ＣＡ，　ＧＳＴ—Ｉ—ＫＢ（１—５４）　底物由Ｂｏｓｔｏｎ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｗｅｌｌｅｓｌｅｙ，ＭＡ合成。　１．２方　法　１．２．１　体外细胞实验　ＦＡＯ细胞使用培养液　ＤＭＥＭ（购自Ｇｉｂｃｏ公司），细胞置于３７　ｏＣ，５％ＣＯ：　的培养箱中培养　在１０　ｃｍ培养皿用１０　ｍＬ　ＤＭＥＭ＋１Ｏ％ＦＢＳ含有高浓度葡萄糖（２５　ｍｍｏｌ／Ｌ）的　培养液中培养至８０％重叠率，经５　ｍＬ　０．Ｉ％ＢＳＡ孵　育１６　ｈ后接受不同浓度（Ｏ～４０　ｕｍｏｌ／Ｌ）的姜黄素预　处理，然后接受鼠ＴＮＦｃｔ　１０　ｎｍｏｌ／Ｌ刺激处理，于２Ｏ　ｍｉｎ后用预冷的ＰＢＳ终止，并收集细胞，用于制作　蛋白匀浆，备用，Ｉ—ＫＢｏｔ的水平用免疫印迹的灰度　表示　ＮＦ—ＫＢ的活性用２０　ｍｉｎ内试验细胞和对照　细胞Ｉ—ＫＢｏｔ灰度差值表示。　１．２．２动物实验利用食物参入法制成含２％姜黄　素的颗粒饲料（Ｌａｂ　Ｄｉｅｔｓ，５ｏｏ８），低温保存。动物饲养　环境为通气，层流环境，恒温（２３　ｏＣ）、恒湿，１２　ｈ　明暗光照循环，２４　ｈ随意饮食环境．动物购入后第　５天开始接受口服葡萄糖耐量试验，并留取空腹血　浆作血浆胰岛素水平，和其它循环因子的检查。在　验证空腹血糖和胰岛素水平后动物被随机分成两　组，并接受姜黄素治疗，对照组用颗粒饲料５００８作　为对照。每天记录动物的摄食量，每３周测量空腹　血糖并留取空腹血浆１次，第６周空腹状态下进行　第２次１：３服葡萄糖耐量试验，并留取空腹血浆。试　验后继续接受姜黄素治疗，第７周于空腹状态下接　受５　Ｕ／ｋｇ胰岛素富强注射，注射后５　ｍｉｎ整，用断颈　法迅速处死动物，留取肝脏经液氮过渡后在一８Ｏ℃　低温冰箱保存，作胰岛素信号分析之用。血浆多种　循环炎症细胞因子的检查用Ｌｉｎｃｏ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ的　Ｌｕｍｉｎｅｘ试剂盒并采用Ｌｕｍｉｎｅｘ　２００监测结果　１．２＿３免疫印迹细胞或组织裂解液（３０　ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｈｅｐｅｓ，１５０　ｍｍｏｌ／Ｌ　ＮａＣ１，　１％Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ一１００，ｐＨ　７．４。蛋白酶抑制剂由１　ｍｍｏｌ／Ｌ　ＰＭＳＦ　３　Ｉｘｍｏｌ／Ｌ　ａｐｒｏｔｉｎｉｎ，５　Ｉｘｍｏｌ／Ｌ　ｐｅｐｓｔａｔｉｎ，１０　Ｉｘｍｏｌ／Ｌ　ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ，　２５　ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎ，２　ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｎａ—ｖａｎａｄａｔｅ，　５　ｍｍｏｌ／Ｌ　ｐ—ｇｌｙｃｅｒｏｌｐｈｏｓｐｈａｔｅ，　１０　ｍｍｏｌ／Ｌ　ＮａＦ，　１　ｍｍｏｌ／Ｌ　Ａｍｍｏｎｉｕｍ　Ｍｏｌｙｂｄａｔｅ，　３０　ｍｍｏｌ／Ｌ　ｔｅｔｒａｓｏｄｉｕｍ　ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ，５　ｍｍｏｌ／Ｌ　ＥＧＴＡ）裂解细　胞，ＳＤＳ一聚丙烯酰胺凝胶（６％），蛋白加热变性后　每孔加３０　ｌＪ，ｇ，电转移仪将蛋白转到ＰＶＤＦ膜。５％　脱脂奶粉ＴＢＳ—Ｔ缓冲液洗膜，加一抗，４℃孵育过　夜，ＴＢＳ—Ｔ缓冲液洗膜，加过氧化物酶标记的ＩｇＧ　抗体（购自Ａｍｅｒｓｈａｍ　ＵＳＡ），室温１　ｈ，ＴＢＳ—Ｔ缓冲　液洗膜，加ＥＣＬ　１　ｍｉｎ，暗室显影２～３　ｍｉｎ后冲洗胶　片。凝胶成像分析系统摄像。　１．２．４统计学分析采用ｔ检验　２　结　果　２．１　姜黄素抑制ＮＦ—ＫＢ的量效和时效关系　Ｆａｏ细胞在１０　ｃｍ２培养皿用１０　ｍＬ在１０％　ＦＢＳ＋ＤＭＥＭ含有高浓度葡萄糖的培养液中培养至　８Ｏ％重叠，经５　ｍＬ　０．１％ＢＳＡ孵育１６　ｈ后接受姜黄　素预处理：剂量关系用梯度浓度如图１所示，时效　曲线用３０　Ｉｘｍｏｌ／Ｌ。预处理后接受鼠ＴＮＦ　１０　ｎｍｏｌ／Ｌ　刺激处理，于２０　ｍｉｎ后用预冷的ＦＢＳ终止，并收集　细胞，用于制作蛋白匀浆。用免疫印迹检测匀浆内　Ｉ—ＫＢａ的水平。如图１Ａ所示：２０　Ｉｘｍｏｌ／Ｌ姜黄素２Ｏ　ｍｉｎ预处理能够抑制ＴＮＦ刺激的ＩＫＢｃｔ的降解。从　姜黄素的时效关系图１Ｂ可见，姜黄素有效剂量３Ｏ　￣ｍｏｌ／Ｌ对ＮＦ．ＫＢ的抑制作用在３０－６０　ｍｉｎ时最强。　２．２姜黄素以逆转肥胖小鼠的胰岛素抵抗　经过６周姜黄素的治疗，小鼠的空腹血糖水平没　有明显下降，但空腹胰岛素的水平下降约３０％（图　２），１：３服葡萄糖耐量曲线的水平也明显下降（图２Ａ），　曲线下面积的比较有明显差异（　Ｏ．Ｏ１）。由空腹血糖　和胰岛素水平计算的ＨＯＭＡ指数［用ＦＢＳ（ｍｍｏＶＥ）×　胰岛素（ｍｍｏｌ／Ｌ）／２２．５计算］也呈明显降低（尺Ｏ．Ｏ５，图　２Ｃ），提示小鼠对胰岛素抵抗的水平得到明显改善。　维普资讯 http://www.cqvip.com 第５期　郭颖，等．免疫抑制剂姜黄素逆转胰岛素抵抗的研究６　５　４　４８３　ｃｕｒｅｕｍｉｎ　０　０　５　１０　２０　４０　Ｉ￣ｍｏｌ／Ｌ（２０　ｍｉｎ）　ｍＴＮＦａ２．３　姜黄素对循环细胞因子的影响　Ｏｂｏｂ小鼠治疗６周后的空腹血浆用Ｌｉｎｃ０　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｌｕｍｉｎｅｘ试剂盒同时检测细胞因子ＩＬ—　３　２　ｌ　Ｏ　圈０豳１圈豳豳豳　０　１０－１０　１０　１０　Ｉ￣ｍｏ－一　……　ｌ　／Ｌ（加ｍｉ　ｎｌ　１５　３０　６０　ｍｉｎ　Ｃｕｒｅｕｍｉｎ　０　ｌＢ，ＩＬ一６和ＴＮＦｃ￣的水平。如图３所示：尽管循环　３０　咖　（２０ｍｉｎ）　＿ｉ亏亏重蚕ＩＫＢａ　Ｂ　胰岛素的水平明显下降，但ＴＮＦｏｔ『（３４．５￣３．４）ｐｇ］　ｍＬ　ＶＳ（３１．３±１．１）ｐｇ／ｍＬ］水平没有明显改变，与之　ｍＴＮＦａ　０　１０　１０　１０　１０　１０　１０　１０　１０　１０　ｌ￣ｍｏｌ／Ｌ　图ｌ姜黄素作用的量效关系与时效关系　Ｆｉｇ．１　Ｄｏｓｅ　ａｎｄ　ｔｉｎｌｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ＮＦ—ＫＢ　对应，循环中ＩＬ—ｌＢ［（３３．９￣３．２）ｐｇ／ｍＬ　ＶＳ（１５．６±　１．１）ｐｇ／ｍＬ］和ＩＬ－６［（７２．１±９．８）ｐｇ／ｍＬ　ＶＳ（４７．２±　５．３）ｐｇ／ｍＬ］水平明显被抑制（Ｐ＜０．０５）。　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｃｕｒｃｕｍｉｎ　一一　薯　０—０　帕０Ｈ　１．６　１．２　一　芸　８　ｊ　Ｏ．８　０．４　Ｏ　Ｏ　ｔ／ｍｉｎ　ｌ００　１５０　Ａ　Ｃｏｎｌｒｏｌ　ｘａ　口一　芸０｝Ｉ　Ｂ　Ｃ　加　ｍ　５　Ｏ　图２姜黄素逆转小鼠胰岛素抵抗　Ｆｉｇ．２　Ｃｕｒｃｕｍｉｎ　ｒｅｖｅｒｓｅｄ　ｉｎｓｕｌｉｎ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｉｎ　ｏｂｏｂ　ｍｉｃｅ　Ａ：Ｇｌｕｃｏｓｅ　ｌｅｖｅｌｓ　ｄｕｒｉｎｇ　ＧＴＹ；Ｂ：Ｆａｓｔｉｎｇ　ｉｎｓｕｌｉｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ａｆｔｅｒ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ；Ｃ：Ｈｏｍａ　ｉｎｄｅｘ　质经６％的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分离，转移到ＰＶＤＦ膜上。用　４Ｇ１０、Ｐ８５、ＡＫＴ抗体作免疫印迹。如图４所示：胰岛　素刺激的ＩＲＳ—ｌ酪氨酸的磷酸化水平明显升高，而　一６０　皂　晏３０　胰岛素受体的磷酸化水平没有明显改变。与ＩＲＳ—ｌ　酪氨酸的磷酸化水平平行，Ｐ８５的磷酸化水平也明显　升高，ＡＫＴ的磷酸化的水平也明显升高。　Ｃｏｎｔｒｏｌ　０　Ｃｕｒｅｕｍｉｎ　・—一ｐＩＲＳ－Ｉ　・—一ｐＩＲ　图３姜黄素对循环细胞因子的影响　Ｆｉｇ．３　Ｃｕｒｃｕｍｉｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　２．４姜黄素为胰岛素信号的增效剂　经胰岛素刺激的肝脏组织在液氮下作粉碎并以　ｌ％Ｔｒｉｔ０ｎ　ＸｌＯ０　ＲＡＰＡ（含有全部蛋白酶抑制剂，和　Ａ　ｉ　圄　蛋白磷酸酶抑制剂）缓冲液在冰点匀浆。经全速４　ｃＩ＝　离心３０　ｍｉｎ取上清液（１　ｍｇ蛋白质）作ＩＲＳ—ｌ和ＩＲ　图４姜黄素对ｏｂｏｂ小鼠胰岛素信号的作用　Ｆｉｇ．４　Ｃｕｒｃｕｍｉｎ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　ｉｎｓｕｌｉｎ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　联合免疫沉淀。经上样缓冲液释放的沉淀目标蛋白　维普资讯 http://www.cqvip.com

４８４　中山大学学报（医学科学版）　第２８卷　３　讨　论　胰岛素抵抗（ＩＲ）及胰岛Ｂ细胞功能减退是２　型糖尿病发病机理的重要环节『９＿．目前被认为是一　个慢性非特异性炎症过程，胰岛素对胰岛素敏感组　织作用的缺陷（肝脏、脂肪组织、骨骼肌）会导致慢　性、低水平炎症状态的恶化，任何与慢性炎症有关　的过程都会削弱胰岛素的作用。作为恶性循环．胰　岛素抵抗又会使炎症恶化『ｌ０ｌ。在抗炎药物对胰岛素　抵抗有逆转作用的报道之后，我们探索新的抗炎药　物对胰岛素抵抗的治疗作用。姜黄素是继阿司匹林　后又一个具有类似协同作用的活性成分…１。在姜黄　素治疗６周后．尽管治疗组和对照组的体重没有明　显改善，但小鼠空腹血糖的水平明显下降，而且胰　岛素的水平也明显降低．提示胰岛素的敏感性明显　升高，葡萄糖耐量曲线在治疗后也明显改善．说明　小鼠整体对葡萄糖的处理能力明显升高．即ｏｂｏｂ　小鼠的胰岛素抵抗的水平得到明显改善。这些都进　一步说明姜黄素治疗改善肥胖诱导的胰岛素抵抗。　研究证实ＮＦ—ｓ：Ｂ是启动和控制炎症的主要核　转录因子．在非激活条件下，ＮＦ—ｓ：Ｂ和胞浆内一种　被称为ＮＦ—ｓ：Ｂ的抑制物（Ｉ—ｓ：Ｂ）的蛋白质结合处于　无功能状态　我们利用胰岛素敏感组织来源的细胞　系ＦＡＯ．验证了姜黄素能够抑制ＴＮＦｏｔ刺激的　Ｉ￣Ｂｃｔ的降解．继而抑制ＮＦ—ＫＢ的活性。我们推测　在高度肥胖ＮＦ—ＫＢ高度激活的肥胖小鼠ｏｂｏｂ体　内，姜黄素可能具有更加明显的改善代谢的作用。　在ＮＦ—ｓ：Ｂ激活的模型上我们证实炎症激发的　高水平循环细胞因子是系统性胰岛素抵抗的原因。　采用细胞因子的中和抗体可以逆转胰岛素抵抗，在　Ｎ　ＫＢ抑制型模型．胰岛素敏感性升高，而且循环中　细胞因子的水平较低。在肥胖发生过程中，ＮＦ—ｓ：Ｂ活　性与动物的体重呈正相关。Ｏｂｏｂ小鼠的肝脏，脂肪　以及淋巴组织中ＮＦ—ｓ：Ｂ的活性水平升高，循环细胞　因子的水平增高，这些都说明炎症介质与胰岛素抵　抗的关系　经姜黄素治疗的肥胖动物循环中细胞因　子ＩＬ＿１．ＩＬ＿６水平均明显下降，由于ＩＬ＿１和ＩＬ＿６是　ＮＦ－ＫＢ活性的重要因子，因此，我们认为姜黄素　在胞浆内有多个作用靶点，通过对上述细胞因子的　抑制作用．影响ＮＦ—ＫＢ的活性，继而达到逆转胰岛　素抵抗和改善胰岛素敏感性的作用。在肝脏组织的　胰岛素信号检测中，胰岛素刺激的ＩＲＳ一１酪氨酸磷　酸化的水平明显升高，ＡＫＴ的活性也明显增强。这些　结果都进一步说明肥胖小鼠胰岛素的敏感性在治疗　后得到了改善，姜黄素能提高ｏｂｏｂ小鼠胰岛素的敏　感性，姜黄素作为一个免疫调节剂用于抑制免疫排　斥的同时，对系统性炎症也有抑制作用．可能是通过　抑制ＮＦ—ｓ：Ｂ来改善胰岛素敏感性的。　参考文献　【１】ＨＵＡＮＧ　Ｈ　Ｃ，ＪＡＮ　Ｔ　Ｒ，ＹＥＨ　Ｓ　Ｆ．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｃｕｒｃｕｍｉｎ，　ａｎ　ａｎｔｉ—ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ａｇｅｎｔ，　ｏｎ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ　ｃｅｌｌ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｆＪ］．Ｅｕｒ　Ｊ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，　１９９２，２２１（３）：３８１—３８４．　【２】　ＣＨＥＮ　Ｈ　Ｗ．ＨＵＡＮＧ　Ｈ　Ｃ．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｃｕｒｅｕｍｉｎ　Ｏｎ　ｃｅ１１　ｃｙｃｌｅ　ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ　ｃｅｌｌｓ叨．Ｂｒ　Ｊ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，１９９８，１２４（／）：１０２９－１０４０．　ｆ３３】　ＳＩＤＨＵ　Ｇ　Ｓ，ＭＡＮＩ　Ｈ，ＧＡＤＤＩＰＡＴＩ　Ｊ　Ｐ，　ｅｔ　ａ１．　Ｃｕｒｃｕｍｉｎ　ｅｎｈａｎｃｅｓ　ｗｏｕｎｄ　ｈｅａｌｉｎｇ　ｉｎ　ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｒａｔｓ　ａｎｄ　ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｍｉｃｅ　ｆＪ］．　Ｗｏｕｎｄ　Ｒｅｐａｉｒ　Ｒｅｇｅｎ，１９９９，７（７）：３６２－３７４．　［４］　ＮＡＩＴＯ　Ｍ，ｗＵ　Ｘ，ＮＯＭＵＲＡ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｔｌｈｅ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｃｕｒｃｕｍｉｎ　ｏｎ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｓｔｒｅｓｓ　ｉｎ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ－ｆｅｄ　ｒａｂｂｉｔｓ　ｆＪ］．Ｊ　Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒ　Ｔｈｒｏｍｂ，２００２，　１　１（９）：２４３—２５０．　【５】　ＳＨＡＲＭＡ　Ｓ，　ＣＨＯＰＲＡ　Ｋ，　ＫＵＬＫＡＲＮＩ　Ｓ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．　Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ　ａｎｄ　ｃｕｒｃｕｍｉｎ　ｓｕｐｐｒｅｓｓ　ｉｍｍｕｎｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ＣＤ２８／ＣＴＬＡ－４　ａｎｄ　ＣＤ８０　ＣＯ—ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ　ｐａｔｈｗａｙ　ｆＪ］．Ｃｌｉｎ　Ｅｘｐ　Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００７，１４７（７）：１５５—１６３．　【６】　ＪＡＧＥＴＩＡ　Ｇ　Ｃ，ＡＧＧＡＲＷＡＬ　Ｂ　Ｂ．“Ｓｐｉｃｉｎｇ　Ｕｐ”ｏｆ　ｔｈｅ　Ｉｍｍｕｎｅ　Ｓｙｓｔｅｍ　ｂｙ　Ｃｕｒｃｕｍｉｎ　ｆＪ］．Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００７，　２７（７）：１９－３５．　【７】　ＹＵＡＮ　Ｍ，　Ｋ０ＮＳＴＡＮＴ０Ｐ０ＵＬ０Ｓ　Ｎ，ＬＥＥ　Ｊ，　ｅｔ　ａ１．　Ｒｅｖｅｒｓａｌ　ｏｆ　ｏｂｅｓｉｔｙ－ａｎｄ　ｄｉｅｔ—ｉｎｄｕｃｅｄ　ｉｎｓｕｌｉｎ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｗｉｔｈ　ｓａｌｉｃｙｌａｔｅｓ　ｏｒ　ｔａｒｇｅｔｅｄ　ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｉｋｋｂｅｔａ　ｆＪ］．　Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００１，２９３（５５３５）：１６７３－１６７７．　【８】　ＣＡＩ　Ｄ，ＹＵＡＮ　Ｍ，ＦＲＡＮＴＺ　Ｄ　Ｆ，ｅｔ　ａ１．Ｌｏｃａｌ　ａｎｄ　ｓｙｓｔｅｍｉｃ　ｉｎｓｕｌｉｎ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ　ｆｒｏｍ　ｈｅｐａｔｉｃ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＩＫＫ－ｂｅｔａ　ａｎｄ　ＮＦ—ｋａｐｐａＢ　ｆＪ】．Ｎａｔ　Ｍｅｄ，　２００５，ｌ１（７）：１８３—１９０．　【９】　程桦，严励，傅祖植．糖尿病综合研究１０年　（１９９２—２００１年）［Ｊ］．中山大学学报：医学科学版，　２００３，２４（１）：１－６．　【１０】ＦＥＲＮ　ＣＮＤＥＺ—ＲＥＡＬ　Ｊ　Ｍ，　ＲＩＣＡＲＴ　Ｗ．　Ｉｎｓｕｌｉｎ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ａｎｄ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｃａｒｉｄｏｖａｓｃｕｌａｒ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ　ｆＪＪ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ　Ｒｅｖｉｅｗｓ，２００３，２４（４）：２７８—３０１．　【ｌ１】０ＳＡｗＡ　Ｔ，　ＫＡＴＯ　Ｙ．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｆｏｏｄ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｉｎ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｓｔｒｅｓｓ　ｃａｕｓｅｄ　ｂｙ　ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉａ　ｆＪ］．Ａｎｎ　Ｎ　Ｙ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ，２００５，１０４３（６）：４４０—４５１．　（编辑徐　杰）