稳定表达HBx的HepG2细胞对罗格列酮敏感性的影响及其机制研究

DOI:10.3781/.jissn.1000󰀁7431.2008.12.004

肿瘤2008年12月第28卷第12期󰀂TumorVo.l28,No.12,December,2008

BasicResearch󰀁基础研究

稳定表达HBx的HepG2细胞对罗格列酮敏感性的影响及其机制研究

毕󰀂杨

1,2

,黄佳祎,吴明军,张󰀂琴,左国伟,何󰀂昀,冯󰀂涛

1,222121,2

(重庆医科大学1.临床检验诊断系;2.生化与分子生物学教研室,重庆󰀂400016)

[摘要]󰀂目的:构建稳定表达x基因编码的乙型肝炎病毒x蛋白(xproteinofhepatitisBvirus,HBx)的HepG2细胞,检测其对罗格列酮敏感性的变化,并探讨HBx与过氧化物酶体增殖物激活受体󰀁(peroxisomeproliferatorsactivatedreceptor󰀁,PPAR󰀁)之间的相互作用在原发性肝癌形成过程中的可能机制。方法:构建pIRES2󰀁HBx真核表达质粒,筛选稳定表达HBx的HepG2细胞;MTT法检测细胞对罗格列酮的敏感性;免疫细胞化学法检测PPAR󰀁定位的变化;RT󰀁PCR和Western印迹法检测PPAR󰀁的表达。结果:成功构建pIRES2󰀁HBx真核表达质粒,获得稳定表达HBx的HepG2细胞;罗格列酮对该细胞的抑制作用明显降低(P<0.05),经丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶的激酶1(mitogen󰀁activatedproteinkinase/extra󰀁cellularsignal󰀁regulatedkinasekinase1,MEK1)抑制剂PD98059预处理后,抑制率有所回升;PPAR󰀁表达量变化的差异无统计学意义,但在细胞中的表达位置发生改变,即从细胞核转至细胞质。结论:HBx可降低HepG2细胞对罗格列酮的敏感性,可能的机制是HBx可改变PPAR󰀁在细胞内的定位以及与DNA的结合能力,并通过磷酸化途径影响PPAR󰀁与配体的结合能力及其活性。[关键词]󰀂肝肿瘤;PPAR󰀁;HepG2细胞;罗格列酮[中图分类号]󰀂R735.5󰀂󰀂[文献标志码]󰀂A󰀂󰀂[文章编号]󰀂1000󰀁7431(2008)12󰀁1034󰀁05

SensitivityofHepG2cellswithstablyexpressingHBxviarosiglitazoneanditsmechanism

BIYang,HUANGJia󰀁wei,WUMing󰀁jun,ZHANGQin,ZUOGuo󰀁wei,HEYun,FENGTao󰀂(1.DepartmentofClinicalLaboratoryDiagnosis;2.DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China)

1,2

1,2

2

2

1

2

1,2

[ABSTRACT]󰀂Objective:ToestablishaHepG2celllinewithstableexpressionofxproteinofhepatitisBvirus(HBx),detectits

sensitivitytorosiglitazone,andexplorethemechanismfortheroleoftheinteractionofHBxwithperoxisomeproliferato󰀁activatedrecep󰀁tor󰀁(PPAR󰀁)inhepatocarcinogenesis.Methods:ThisworkconstructedpIRES2󰀁HBxeukaryoticexpressionplasmid,screenedHepG2cellclonewithstableexpressionofHBx.ThesensitivityofHBx󰀁expressingHepG2cellstorosiglitazonewasassessedbyMTTassay.ThechangeinPPAR󰀁locationwasdetectedbymimunocytochemistry.ThemRNAandproteinexpressionsofPPAR󰀁weredeterminedbyRT󰀁PCRandWesternblottingrespectively.Results:ThisworksuccessfullyconstructedpIRES2󰀁HBxeukaryoticexpressionplasmidandobtainedtheHepG2celllinewithstableexpressionofHBx.TheinhibitoryeffectofrosiglitazoneonHBx󰀁expressingHepG2cellsde󰀁creasedobviously,buttheinhibitoryeffectwaspartlyreversedwhenthecellswerepretreatedwithPD98059,aninhibitorofmitogen󰀁ac󰀁tivatedproteinkinase/extracellularsignal󰀁regulatedkinasekinase1(MEK1).ThedifferenceinPPAR󰀁expressionwasnotsignifican.tButthelocationofPPAR󰀁waschanged.Itmovedfromnucleustocytoplasm.Conclusion:HBxreducesthesensitivityofHepG2cellstorosiglitazone.ThepossiblemechanismisthatHBxchangesthesite󰀁specificlocationofPPAR󰀁anddecreasesitsbindingabilitytoDNA,thusinfluencethebindingofPPAR󰀁toitsligandandtheactivityofPPAR󰀁throughphosphorylationpathway.[KEYWORDS]󰀂Liverneoplasms;PPARgamma;HepG2cells;Rosiglitazone

[Tumor,2008,28(12):1034󰀁1038]

󰀂󰀂乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)感染是引起肝癌的主要原因之一,其中x基因编码的乙型

肝炎病毒x蛋白(xproteinofhepatitisBvirus,HBx)是一种反式作用因子,可与细胞内多种参与转录和基因的因子发生结合,广泛激活病毒和细胞的启动子,参与基因,影响细胞生长、基因转录和细胞凋亡,抑制对损伤DNA的切除修复,因此与原发性肝癌的发生和发展密切相关

[1]

因子,通过转录来控制效应基因的表达、调节细胞分化以及诱导细胞凋亡等。PPAR󰀁特异配体罗

格列酮(rosiglitazone)等通过与PPAR󰀁特异性配体结合,激活PPAR󰀁,影响许多肿瘤相关基因的表达及转录因子的活性,抑制结直肠癌、乳腺癌、肝癌、前列腺癌、胃癌等肿瘤细胞的增殖,并且对肝癌细胞HepG2增殖的抑制效应呈浓度依赖性

[2󰀁3]

。本研

。过氧化物酶

究观察了稳定表达HBx的HepG2细胞对罗格列酮敏感性的变化,探讨HBx与PPAR󰀁之间的相互关系在原发性肝癌形成中的作用。1󰀂材料与方法

1.1󰀂主要材料󰀂携带HBx基因的pAd󰀁Track󰀁HBx质粒由冯涛教授构建[4]

体增殖物激活受体󰀁(peroxisomeproliferator󰀁activa󰀁

tedreceptor󰀁,PPAR󰀁)是一类由配体激活的核转录

[基金项目]󰀂国家自然科学基金资助项目(编号:30771925)[作者简介]󰀂毕󰀂杨(1981 ),女(汉族),博士研究生Correspondenceto:FENGTao(冯󰀂涛)󰀂󰀂󰀂󰀂󰀂󰀂E󰀁mai:lfengtao9_9@yahoo.com

;真核表达质粒pIRES2󰀁第12期.毕󰀂杨,等.稳定表达HBx的HepG2细胞对罗格列酮敏感性的影响及其机制研究

󰀁1035󰀁

eGFP以及大肠杆菌DH5󰀂为本实验室所保存;内切酶EcoR!、Xho!,T4DNAligase和pfupremix均购自TaKaRa公司;DNAmarker、质粒抽提试剂盒和总RNA提取试剂盒均购自北京天为时代科技有限公司;RT󰀁PCR试剂盒购自Toyaba公司;G418和Lipofecta󰀁

TM

mine2000均为Invitrogen公司产品;胎牛血清为Hyclone公司产品;兔抗人 󰀁actin、兔抗人Histone、兔抗人PPAR󰀁抗体为SantaCruz公司产品;罗格列酮为Cayman公司产品;PD98059为MBIFermentas公司产品;PCR引物由上海英俊生物技术有限公司合成;基因测序由重庆医科大学传染病研究所完成。

1.2󰀂主要仪器󰀂主要仪器包括DYY󰀁11型电泳仪、垂直电泳槽、转膜槽、可见/紫外分光光度计、高速冷冻离心机、倒置荧光显微镜和酶标仪等。1.3󰀂实验方法

1.3.1󰀂构建pIRES2󰀁HBx真核表达质粒󰀂Primer5.0设计扩增HBxcDNA全长的引物序列,上游引物(引入Xho!酶切位点,符合Kozak序列)序列为5∀󰀁TATCTCGAGACCATGGCTGCTAGGGTGTGCT󰀁3∀,下游引物(引入EcoR!酶切位点)序列为5∀󰀁GC󰀁CGAATTCCTAGGCAGAGGTGAAAAAGTTG󰀁3∀。以携带HBx基因的pAd󰀁Track󰀁HBx质粒为模板,利用上述引物PCR扩增获得目的基因片段(486bp)。扩增条件:第1步,94#5min;第2步,94#20s、#20s、72#40s,25个循环;最后72#延伸5min,1%琼脂糖凝胶电泳鉴定,PCR产物纯化后经Xho!和EcoR!双酶切处理,再次纯化后定向连接至同样经Xho!和EcoR!酶切处理的pIRES2󰀁eGFP质粒。转化大肠肝菌Top10,卡那霉素抗性平板筛选获得阳性单克隆,扩增培养后抽提质粒,经PCR和Xho!、EcoR!双酶切处理进行鉴定后,将鉴定正确的克隆送交本校传染病研究所测序,获得pIRES2󰀁HBx真核表达质粒,用紫外分光光度计测定DNA浓度备用。1.3.2󰀂构建稳定表达HBx的HepG2细胞󰀂采用脂质体法使质粒pIRES2󰀁HBx转染HepG2细胞,同时设空质粒组和对照组,24h后在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)的表达,3d后加入G418(终浓度为600!g/mL)筛选阳性克隆,待对照组细胞全部死亡后改为400!g/mL的维持浓度,挑取阳性克隆后扩大培养,并保存备用,后续实验均使用第3代细胞。提取各组细胞的mRNA及蛋白质,以 󰀁actin为内参照(上游引物序列为5∀󰀁ACGAGACCACCTTCAACTCCATC󰀁

3∀,下游引物序列为5∀󰀁TAGAAGCATTTGCGGTG󰀁GACGA󰀁3∀),应用RT󰀁PCR检测HBx的表达。

1.3.3󰀂MTT法检测细胞对罗格列酮的敏感性󰀂将3组细胞按2∃10个/孔均匀种植到96孔板中,待细胞贴壁后换为无血清无双抗的培养液继续培养24h,将各组细胞分成3个检测浓度,分别加入0、20、40和80!mol/L的罗格列酮,另留空白细胞及空白培养液作为对照。HBx组另设2组,分别加入40和80!mol/L的罗格列酮,在加药前用PD98059(100!mol/L)作用4h,药物加入24h后,每孔加入5mg/mL的MTT,4h后吸出上清液,每孔加入DMSO200!L,置于酶标仪上振荡10min,于520nm处测定吸光度(D)值,计算不同浓度组细胞的抑制率(inhibitingrate,IR):IR=(1-D加药孔/D对照孔)∃100%。

1.3.4󰀂免疫细胞化学法检测PPAR󰀁的表达和定位将HepG2/HBx组、HepG2/空质粒组、HepG2细胞组分别按1∃10个/孔均匀种植于置于24孔板内的载玻片上,待细胞融合度为70%~80%时,取出载玻片,固定,3%H2O2室温处理5~10min,以清除内源性过氧化物酶,滴加PPAR󰀁兔抗人单克隆抗体(1︰100),室温作用1~2h,用PBS洗涤,滴加辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体,室温下作用30min,用PBS洗涤,DAB显色,脱水后用缓冲甘油固封,在光学显微镜下进行观察。

1.3.5󰀂RT󰀁PCR和Western印迹法检测PPAR󰀁表达的变化󰀂提取各组细胞的mRNA,反转录获得cDNA,使用能够特异性扩增PPAR󰀁(379bp)片段的引物(上游引物序列为5∀󰀁CTTTATGGAGC󰀁CCAAGTTTGAGTT󰀁3∀,下游引物序列为5∀󰀁GAAAT󰀁GTTGGCAGTGGCTCAG󰀁3∀)进行PCR扩增(94#5min;94#20s、50#20s、72#40s,30个循环;72#5min),同时以 󰀁actin作为内参照平行管(引物及反应条件同上),2%琼脂糖凝胶电泳鉴定,并分析灰度值。根据参考文献[5]的方法提取各组细胞的总蛋白以及细胞质和细胞核内的蛋白,取等量蛋白上样,10%聚丙烯酰胺凝胶分离蛋白,待蛋白分离后转移至纤维素膜上。用5%牛奶封闭1h,加入一抗(PPAR󰀁为1︰300, 󰀁actin为1︰500,Histone为1︰500),4#过夜;洗膜,加入稀释后的二抗(1︰5000),室温下放置1h,再次洗膜进行电化学发光,分析灰度值。

1.4󰀂统计学方法󰀂采用SPSS10.0软件对数据进行统计学分析,数据以x󰀂%s表达,比较各组之间的5

4

󰀁1036󰀁

差异,以P<0.05为差异有统计学意义。2󰀂结󰀂果

2.1󰀂构建pIRES2󰀁HBx真核表达质粒󰀂HBxPCR产物为1条486bp的特异性条带,经酶切处理后插入载体pIRES2󰀁eGFP,经卡那霉素筛选获得阳性单克隆,扩增培养后,以此重组质粒为模板,扩增后同样获得1条486bp的条带。同时,对该重组质粒用Xho!和EcoR!进行双酶切可见大小分别为5.3∃3

10bp的载体和486bp的目的条带(HBx)(图1)。对阳性克隆质粒进行测序,结果与GeneBank所报道的HBx序列完全一致,说明pIRES2󰀁HBx真核表达质粒构建成功,质粒浓度为0.827!g/!L。

肿瘤󰀂2008年12月,第28卷

酮对细胞增殖的抑制作用随药物浓度的增加而增加,对HBx组的抑制作用要明显低于空质粒组和对照组(P<0.05);事先加入PD98059孵育的HBx组细胞后,抑制率明显上升(P<0.05),但未恢复至空质粒组的抑制效果(表1)。

表1󰀂罗格列酮对各组细胞的抑制作用

Table1󰀂Theinhibitingratesofdifferentcells

treatedbyrosiglitazone

(󰀂x%s/%,n=5)

Cellgroup

HepG2

pIRES2󰀁eGFP/HepG2pIRES2󰀁HBx/HepG2pIRES2󰀁HBx/HepG2+PD98059

*

Inhibitingrate

RosiglitazonecB/(mol󰀁L󰀁1)

2033.24%9.5231.31%4.74

40

54.02%3.1855.26%5.40

80

67.48%3.0762.87%3.41

***

17.%4.7029.30%4.80.18%5.08

41.71%5.09∋53.20%4.23∋

∋

P<0.05,vsHepG2andpIRES2󰀁eGFP/HepG2;

pIRES2󰀁HBx/HepG2

P<0.05,vs

图1󰀂pIRES2󰀁HBx质粒的构建

Fig.1󰀂ConstructionofpIRES2󰀁HBxplasmid

M:DNAmarker(Hind&marker);1:HBxPCRproductofpIRES2󰀁

HBx;2:pIRES2󰀁eGFPplasmiddigestedbyXho!andEcoR!;3:pIRES2󰀁HBxplasmiddigestedbyXho!andEcoR!

2.4󰀂免疫细胞化学法检测PPAR󰀁的表达和定位的

变化󰀂对照组和空质粒组的细胞PPAR󰀁抗体特异性染色均位于细胞核内,HBx组的细胞核和细胞质均有染色,但3组细胞核内染色深浅无明显差异(图3)。

2.2󰀂构建获得稳定表达HBx的HepG2细胞󰀂脂质体转染48h后,空质粒组和HBx组均可见绿色荧光的表达(图2A、B)。G418筛选中,细胞逐渐死亡,15d左右对照组细胞全部死亡,其他2组有20%~30%的细胞存活,并仍表达eGFP。第3代细胞的RT󰀁PCR结果显示,各组的 󰀁actin在表达一致的情况下,仅HBx组表达HBx基因,由此表明稳定表达HBx的HepG2细胞构建成功(图2C)。

图3󰀂PPAR󰀁在细胞中的表达定位(DAB染色,∃400)Fig.3󰀂TheexpressionandlocalizationofPPAR󰀁in

differentHepG2cells(DABstaining,∃400)

A:HepG2;B:pIRES2󰀁eGFP/HepG2;C:pIRES2󰀁HBx/HepG2

2.5󰀂RT󰀁PCR和Western印迹法检测PPAR󰀁表达的变化󰀂PT󰀁PCR结果显示,各组细胞 󰀁actin的表达一致,PPAR󰀁的表达也无明显差异(图4A)。

图2󰀂转染48h后绿色荧光蛋白在细胞中的表达

(A和B,∃100)以及各组细胞HBx的表达(C)Fig.2󰀂Expressionofgreenfluorescentproteinin

HepG2cellsaftertransfectionfor48h(AandB,∃100)andtheexpressionofHBx

ineachgoup(C)

A:pIRES2󰀁HBx/HepG2;B:pIRES2󰀁eGFP/HepG2;M:DNAmarker(200󰀁600bp);1:pIRES2󰀁HBx/HepG2;2:pIRES2󰀁eGFP/HepG2;3:HepG2cell

图4󰀂各组HepG2细胞PPAR󰀁mRNA(A)和

蛋白(B1~3)的表达

Fig.4󰀂ExpressionlevelsofPPAR󰀁mRNA(A)and

protein(B1󰀁3)indifferentHepG2cells

A:PPAR󰀁mRNA;B1󰀁3:PPAR󰀁protein(B1:Totalprotein;B2:Cy󰀁toplasmicprotein;B3:Nuclearprotein);M:DNAmarker;1:pIRES2󰀁HBx/HepG2;2:pIRES2󰀁eGFP/HepG2;3:HepG2cell2.3󰀂MTT法检测细胞对罗格列酮的敏感性󰀂罗格列第12期.毕󰀂杨,等.稳定表达HBx的HepG2细胞对罗格列酮敏感性的影响及其机制研究

󰀁1037󰀁

󰀂󰀂Western印迹法检测结果显示,各组细胞的总蛋白和细胞核蛋白的PPAR󰀁表达差异无统计学意义,而HBx组细胞质的PPAR󰀁表达较空质粒组和对照组有明显升高(图4B)。3󰀂讨󰀂论

原发性肝细胞癌是一种恶性程度极高的恶性肿瘤。原发性肝癌的流行病学研究表明,HBV是主要的致病因素之一。HBV携带者罹患原发性肝细胞癌的概率较正常人高100~200倍。HBV是一种非细胞致病性的拥有完整包膜的嗜肝性双链DNA病毒,为双股环状DNA,约含有3200个核苷酸,其负股DNA含有4个开放读码框架,分别为S、C、P和x区。其中x基因区的编码产物x蛋白质(HBx)是一种多功能的调节蛋白,能与细胞内多种参与转录和基因的因子相结合,广泛激活病毒和细胞的启动子,参与基因,破坏DNA的修复功能,促进细胞增殖,因此与原发性肝癌的发生和发展密切相关

[6󰀁7]

PPAR󰀁的表达有轻度升高可能是由于PPAR󰀁在细胞质中的表达比例不一样所致,因此尽管存在定位的变化,但是对细核内蛋白表达的影响不大。由此提示,HBx可能不参与PPAR󰀁上游转录基因的,但是可以影响PPAR󰀁的核定位以及与DNA的结合功能。

PPAR󰀁还是一种磷蛋白,其转录活性受到激酶和磷酸酶的影响,通过ERK/MAPK途径可促进细胞的有丝,通过抑制性磷酸化和调节PPAR󰀁的核

[11󰀁13]

浆比例来影响其基因活性。大量研究表明,HBx可通过反式激活酶联信号系统来激活途径,从而激活或抑制转录因子的表达或活性。本研究结果显示,利用ERK1/2的上游激酶丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶的激酶1(mitogen󰀁activatedproteinkinase/extra󰀁cellularsignal󰀁regulatedkinasekinase1,MEK1)的抑制剂PD98059预处理HepG2/HBx细胞,可提高HepG2细胞对罗格列酮的敏感性,表明细胞外信号调节激酶(extra󰀁cellularsignal󰀁regulatedkinase,ERK)途径可能参与了HBx对PPAR󰀁转录活性的影响。ERK1/2途径可能通过直接磷酸化PPAR󰀁L来抑制其对下游靶基因的转录活性,也是影响PPAR󰀁核定位的一个因素。此外,对PPAR󰀁C端的激素结合区进行分析的结果显示其含有配体结合域和配体依赖的激活功能2区域,HBx与该段无蛋白与蛋白间的直接作用,但是转录活化域的磷酸化可以影响PPAR󰀁与配体的结合;HepG2/HBx细胞也可因HBx激活了ERK信号,导致激活功能2区域的磷酸化,使PPAR󰀁与其配体罗格列酮的结合能力下降,从而降低其抑制肿瘤细胞增殖的能力。在阻断这一途径后,抑制率有所回升,但是由于HBx与PPAR󰀁的蛋白与蛋白间相互作用对PPAR󰀁的核定位以及与DNA的结合功能存在影响,因此即便有所回升也无法达到对照组的水平。PPAR󰀁可通过调节基因的转录,诱导肿瘤细胞的分化和凋亡,抑制肿瘤的血管生成,从而发挥抗肿瘤的作用

[14]

。PPAR󰀁是过氧化物酶增殖物激活受体超家

[8]

族中的一员,可以分为4个主要的功能域,包括(1)N端非配体依赖的转录活化域(A/B区);(2)C区,与启动子和目标基因发生结合的区域;(3)铰链区,作为DNA和配体相结合的区域;(4)C端的激素结合区,在此区域PPAR󰀁与相应配体发生结合后被活化。研究发现,PPAR󰀁的活化可抑制包括肝癌细胞在内的多种肿瘤细胞的生长

[2󰀁3,9]

。

本研究结果显示,HepG2细胞在罗格列酮药物的作用下,细胞增殖明显受抑,且这种抑制作用是剂量依赖性的;而稳定表达HBx的细胞,其PPAR配体的抑制增殖作用却明显减弱;由此说明HBx与PPAR󰀁之间存在一些必然的联系,从而使HepG2细胞对罗格列酮的敏感性大为降低。目前的研究发现,HBx与PPAR󰀁之间存在蛋白与蛋白间的相互作用,这种作用可能影响了PPAR󰀁的核定位以及

[10]

DNA的结合功能。Choi等的研究发现,HBx可在活体内与PPAR󰀁形成复合体,这个结合位点位于DNA结合域铰链区,并且参与核定位和异二聚体的形成;同时荧光素酶报告基因检测结果发现HBx可明显抑制PPAR󰀁的下游转录活性。免疫细胞化学检测结果显示,HBx作用于细胞后,PPAR󰀁从细胞核转移至细胞质;但RT󰀁PCR结果显示,经HBx作用后PPAR󰀁mRNA的表达并无明显变化,Western印迹法检测各组的总蛋白和细胞质蛋白表达水平,同样提示差异无统计学意义。HBx组细胞质中;而HBx可通过与PPAR󰀁的相互作用

以抵抗PPAR的抑制肿瘤细胞生长的作用,从而进一步促进原发性肝癌的发生和发展。推测其中可能的机制是由于HBx与PPAR󰀁的DBA铰链区发生结合,从而影响其定位和DNA结合功能;HBx也可能通过直接或间接的磷酸化作用,影响PPAR󰀁与配体的结合以及PPAR󰀁的活性。HBx是否通过ERK1/2途径参与了激活功能2区域的磷酸化作用及其具体的作用机制,正在进一步的研究之中,以期为阐明󰀁1038󰀁

HBx与PPAR󰀁的相互关系在原发性肝癌中的作用提供实验依据。[参考文献]

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rator󰀁activatedreceptor󰀁gammaligandsasinvestigationalmodula󰀁torsofangiogenesis[J].ExpertOpinInvestigDrugs,2007,16(10):1561󰀁1572.[收稿日期]󰀂2007󰀁11󰀁03[本文编辑]󰀂林󰀂琳

[修回日期]󰀂2008󰀁02󰀁19

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(肿瘤)杂志(中国标准连续出版物号:CN31󰀁1372/R,ISSN1000󰀁7431)是上海市肿瘤研究所、癌基因及相关基因国家重点实验室和世界卫生组织癌症研究合作中心共同主办的专业学术期刊,于1981年1月创刊,是国内最早报道肿瘤相关领域成果和进展的专业期刊之一。自创刊以来,该刊一直被北京大学图书馆出版的(中文核心期刊要目总览)、中国科学院的∗中国科学引文数据库+和中国科学技术信息中心的∗中国科技论文核心数据库+收录,并被CambridgeScientificAbstracts(CSA,美国)、ChemicalAbstracts(CA,美国)、EMBAS(Elsevier,荷兰)、VINITIAbstractsJournal(俄罗斯)、IndexCopernicus(波兰)、JST(日本)等数据库收录,是经卫生部和国家食品药品监督管理局共同审核认定的可以发布处方药广告的医学、药学专业刊物。

(肿瘤)杂志报道国内外肿瘤基础和临床研究的新理论、新成果、新经验、新技术、新方法和新动态,设有专家论坛、研究快报、专题报道、基础研究、临床研究、流行病学研究、技术与方法、病例报告、临床病理讨论、综述、讲座等栏目。为从事肿瘤防治和研究的医药卫生工作者、医学院校师生及其他有关学科人员提供学术交流的平台,旨在推动和促进我国肿瘤事业发展和国内外学术交流。

(肿瘤)杂志为月刊,大16开本,每册定价人民币12.00元,全年144元。每月25日出版,国内外公开发行。邮发代号4󰀁2,国外发行代号BM4731。全国各地邮局均可订阅,亦可与编辑部直接联系订购(联系人:周老师,可享受9折优惠)。联系地址:上海市斜土路2200弄25号(邮编:200032);联系电话:021󰀁032388,436792;传真021󰀁032388;E󰀁mai:ltumor@cjtsc.icom;网址:http://www.cjtsc.icom。

(本刊编辑部)