ｒ，中南大学学报‘ Ｃ 版 ｅｎｔ Ｓｏｕｔｈ Ｕｎｉｖ ｅｆＭ ｄ Ｓｃｉ） ２ｏｌ８ ４３（１０）ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｓｕｍｅｄ．。ｒｇ… … ＤＯＩ．＇１０．１ １８１７／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－７３４７．２０１８．１０．００６ ｗｗｗ．ｃｓｕｍｅｄ．ｏｒｇ／ｘｂｗｋ／ｆｉｌｅｕｐ／ＰＤＦ／２０１８１０１０７５．ｐｄｆ 和厚朴酚通过激活线粒体依赖的Ｓｉｒｔ３／ＡＨＰＫ途径减轻脂多糖 所致的急性呼吸窘迫综合征 陈兰，李雯，王导新 （重庆医科大学附属第二医院呼吸内科，重庆４０００１０） ［摘要］目的：探讨和厚朴酚（ｈｏｎｏｋｉｏｌ，ＨＫＬ）对脂多糖（１ｉｐｏＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ）所致的急性呼吸窘迫综合征ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｄｉｓｔｒｅｓｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＡＲＤＳ）￣＊微血管内皮细胞的作用及潜在机制。方法：动物实验中，４ｏ只ＣＳ７ＢＬ／６Ｊ／Ｊ￣鼠随 机分为对照组（Ｃｏｎ组）、ＬＰＳ干预组（ＬＰＳ组）、ＬＰＳ＋ＨＫＬ干预组（ＨＫＬ组）、ＬＰＳ＋ＨＫＬ＋尼克酰胺（ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ，ＮＡＭ）干 预组（ＮＡＭ组），每组ｌ０只。细胞实验中，实验分为对照组（Ｃｏｎ组）、ＬＰＳ干预组（ＬＰＳ组）、ＬＰＳ＋ＨＫＬ十预组（ＨＫＬ组）、 ＬＰＳ＋ＨＫＬ＋ＮＡＭ干预组（ＮＡＭ组）和ＬＰＳ＋ＨＫＬ＋混合抑制剂（ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｃ，ＣＭＣ）干预组（ＣＭＣ组）。采用ＨＥ染色观察肺 组织病理改变；检测支气管肺泡灌洗液（ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｆｌｕｉｄ，ＢＡＬＦ）中蛋Ｆ＿＿Ｉ浓度、细胞总数、中性粒细胞数及 肺组织髓过氧化物酶（ｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ＭＰＯ）活性；伊文思蓝实验检测肺微血管渗透性的改变；采用细胞计数试剂盒 （ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔｉｎｇｋｉｔ一８，ＣＣＫ－８）检￣）Ｈ．］ｉＨＫＬ对人肺微血管内皮细胞ｈｕｍａｎｐｕｌｍｏｎａｒｙｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｉｌｓ，ＨＰＭＥＣｓ）活 力的影响；采用抑制剂ＮＡＭ和ＣＭＣ干预探讨ＨＫＬ保护性作用的分子机制；采用Ｗｅｓｔｅｒｎ￣［Ｊ迹检测组织或细胞Ｓｉｆｔ３， ｃａｓｐａｓｅ一３，ｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓｅ．３，Ｂｃ１．２，Ｂａｘ，ｐ－腺苷酸活化蛋白激酶（ｐ．ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ， ｐ－ＡＭＰＫ）和ＡＭＰＫ蛋白表达。结果：动物实验中，与Ｃｏｎ组比较，ＬＰＳ组小鼠肺组织呈典型的ＡＲＤＳ病理改变，肺组 织湿干重ｋＬ（Ｗ／Ｄ）值及ＭＰＯ活性、ＢＡＬＦ蛋白浓度、细胞总数和中性粒细胞数、伊文思蓝渗漏指数ｅｖａｎｓ ｂｌｕｅ ｌｅａｋｉｎｇ ｉｎｄｅｘ，ＥＬＩ）和肺组织ｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓｅ一３表达均显著升高（均Ｐ＜０．０５），而Ｓｉｒｔ３表达明显下调（Ｐ＜０．０５）；与ＬＰＳ组比较，ＨＫＬ 组的上述改变显著改善（均Ｐ＜０．０５）；与ＨＫＬ组比较，ＮＡＭ组中ＨＫＬ干预的疗效可部分抑制（均Ｐ＜０．０５）。细胞实验 中，与ＬＰＳ组比较，ＨＫＬ组ＨＰＭＥＣｓ的存活率升高（ｐ＜０．０５），Ｂｃｌ一２和Ｓｉｒｔ３蛋白表达显著上调（均Ｐ＜０．０５），Ｂａｘ和ｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓｅ．３蛋白表达下调（均Ｐ＜０．０５），ＡＭＰＫ通路活化加强（ｐ＜Ｏ．０５）；与ＨＫＬ组比较，ＣＭＣ组ＨＫＬ干预的疗效被部分抑制 （均Ｐ＜０．０５）。结论：ＨＫＬ￣，够显著减轻ＬＰＳ所致的ＡＲＤＳ，抑制肺微血管内皮凋亡，其作用可能是通过线粒体依赖的 Ｓｉｒｔ３／ＡＭＰＫ￣，，径实现的。 ［关键词】急性呼吸窘迫综合征；和厚朴酚；肺微血管内皮细胞；凋亡；Ｓｉｒｔ３／腺苷酸活化蛋白激酶信号通路 Ｈｏｎｏｋｉｏｌ ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ｌｊｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｃｕｔｅ ｒｅｓＤｌ● ｒａｔｏｒｙ ｄ ０●Ｉ ．ｓｔｒｅＳＳ ｓｙｎｄ ■ ｒｏｍｅ ＶＩ● ａ ａｃｔｉ一■ Ｖａｔｌ．■ ０ｎ Ｏｔ ● ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉｄｒｉｏｎ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｓ…ｏｎ－ｄｅＰ ｄｅｎｔ ｉｒｔ３／Ａ ：ｊ． 一 ＿ｖｌｒ－ＰＫ ｐａｔｈｗａｙ Ｐａｔｈｗａｙ ＣＨＥＮＬａｎ，ＬＩＷｅｎ，ＷＡＮＧＤａｏｘｉｎ 收稿日期（Ｄａｔｅ ｏｆｒｅｃｅｐｔｉｏｎ）：２０１７．１ １－０９ 第一作者（Ｆｉｒｓｔ ａｕｔｈｏｒ）：陈兰，Ｅｍａｉｈ ｃｌａｎ１３７＠１６３．ｃｏｒｎ，ＯＲＣＩＤ：００００—０００２—１２１４—２８３７ 通信作者（Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ）：王导新，Ｅｍａｉｌ：ｗａｎｇｄａｏｘｉｎ１＠１６３．ｃｏｍ，ＯＲＣＩＤ：００００—０００１—７８２０—７８９４ 基金项目（Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｉｔｅｍ）：闰家Ａ然科学基金（８１６７００７１）。Ｔｈｉｓｗ０ｒｋｗａｓ ｓｕｐｐｏｒｔｅｄｂｙｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒｌＳｃｉａｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａ（８１６７００７１） １０７６ 中南大学学报（医学版） ２０１８，４３（１０）ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｓｕｍｅｄ．ｏｒｇ （ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＳｅｃｏｎｄＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＣｈｏｎｇｑｉｎｇＭｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００１１３，Ｃｈｉｎａ） Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｈｏｎｏｋｉｏｌ（ＨＫＬ）ｏｎ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ（ＬＰＳ）一ｉｎｄｕｃｅｄ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｄｉｓｔｒｅｓｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＡＲＤＳ）ａｎｄ ｔｈｅ ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ． Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｉｎ ａｎｉｍａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ４０ Ｃ￥７ＢＬ／６Ｊ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ａ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（Ｃｏｎ ｇｒｏｕｐ），ａ ＬＰＳ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ（ＬＰＳ ｇｒｏｕｐ），ａ ＬＰＳ＋ｈｏｎｏｋｉｏｌ（ＨＫＬ）ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ（ＨＫＬ ｇｒｏｕｐ）ａｎｄ ａ ＬＰＳ＋ＨＫＬ＋ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ（ＮＡＭ）ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ（ＮＡＭ ｇｒｏｕｐ） （ｎ＝１０ ｉｎ ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ）．Ｉｎ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ａ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（Ｃｏｎ ｇｒｏｕｐ）Ｊ ａ ＬＰＳ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ（ＬＰＳ ｇｒｏｕｐ），ａ ＬＰＳ＋ＨＫＬ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ（ＨＫＬ ｇｒｏｕｐ），ａ ＬＰＳ＋ＨＫＬ＋ＮＡＭ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ（ＮＡＭ ｇｒｏｕｐ）Ｊ ａｎｄ ａ ＬＰｓ＋ＨＫＬ＋ｃ０ｍｐｏｕｎｄ Ｃ（ＣＭＣ）ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ（ＣＭＣ ｇｒｏｕｐ）．Ｔｈｅ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｌｕｎｇ ｔｉｓｓｕｅｓ ｗｅｒｅ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｂｙ ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ ａｎｄ ｅｏｓｉｎ（ＨＥ）ｓｔａｉｎｉｎｇ；ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎＪ ｔｏｔａｌ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒ ｌａｖａｇｅ ｌｆｕｉｄ（ＢＡＬＦ）ａｎｄ ｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（ＭＰＯ）ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｔｈｅ ｌｕｎｇ ｔｉｓｓｕｅｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ；ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ Ｅｖａｎｓ ｂｌｕｅ ａｓｓａｙ；ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＨＫＬ ｏｎ ｔｈｅ ｖｉｔａｌｉｔｙ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｉｌｓ ｗｅｒｅ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｂｙ ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔｉｎｇ ｋｉｔ一８（ＣＣＫ－８）；ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ＮＡＭ ａｎｄ ＣＭＣ ｗｅｒｅ ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＨＫＬ．Ｒｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ Ｓｉｒｔ３Ｊ ｃａｓｐａｓｅ一３，ｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓｅ一３Ｊ Ｂｃｌ一２，Ｂａｘ，ｐ—ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ（ｐ－ＡＭＰＫ）ａｎｄ ＡＭＰＫ ｉｎ ｌｕｎｇ ｔｉｓｓｕｅｓ ｏｒ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ． Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｉｎ ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌｓ，ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ Ｃｏｎ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｍｉｃｅ ｉｎ ｔｈｅ ＬＰＳ ｇｒｏｕｐ ｄｉｓｐｌａｙｅｄ ｔｙｐｉｃａｌ ＡＲＤＳ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｎｇｅｓ，ａｎｄ ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆｌｕｎｇ ｗｅｔ／ｄｒｙ ｗｅｉｇｈｔ（Ｗ／Ｄ）ａｎｄ ＭＰＯ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｔｈｅ ｌｕｎｇ ｔｉｓｓｕｅｓＪ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｔｏｔａｌ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ ｉｎ ＢＡＬＦ，Ｅｖａｎｓ ｂｌｕｅ ｌｅａｋｉｎｇ ｉｎｄｅｘ（ＥＬＩ），ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓｅ一３ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ（ａｕ Ｐ＜０．０ｓ），ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ Ｓｉｒｔ３ ｗａｓ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０ｓ）．Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＬＰＳ ｇｒｏｕｐ， ｔｈｅ ａｂｏｖｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ＬＰＳ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ＨＫＬ ｇｒｏｕｐ（ａｌｌ Ｐ＜０．Ｏ５）ｊ Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＨＫＬ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｃｕｒａｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＨＫＬ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｐａｒｔｌｙ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ＮＡＭ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．ｏｓ）．Ｉｎ ｃｅｌｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓＪ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＬＰＳ ｇｒｏｕｐＪ ｔｈｅ ＨＰＭＥＣｓ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ ｔｈｅ ＨＫＬ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｍａｒｋｅｄｌｙ ｉｍｐｒｏｖｅｄ（Ｐ＜０．０ｓ），ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ Ｂｃｌ一２ ａｎｄ Ｓｉｒｔ３ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ（Ｐ＜０．０ｓ），ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ Ｂａｘ ａｎｄ ｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓｅ一３ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄ（Ｐ＜０．０ｓ），ａｃｃｏｍｐａｎｉｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆＡＭＰＫ ｐａｔｈｗａｙ（Ｐ＜０．０５）ｉｎ ｔｈｅ ＨＫＬ ｇｒｏｕｐ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＨＫＬ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｃｕｒａｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＨＫＬ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｗａｓ ｐａｒｔｌｙ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ＣＭＣ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜Ｏ．０ｓ）． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＨＫＬ ｃａｎ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ａＲｅｎｕａｔｅ ＬＰＳ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｉｒｔ３／ＡＭＰＫ ｐａｔｈｗａｙ． ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｄｉｓｔｒｅｓｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ；ｈｏｎｏｋｉｏｌ；ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ； ａｐｏｐｔｏｓｉｓ；Ｓｉｒｔ３／ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎａｓｅ ｋｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ 急性呼吸窘迫综合征（ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｄｉｓｔｒｅｓｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＡＲＤＳ）是常见的临床危重症，由心源性以 外的各种肺内外致病因素导致的急性、进行性缺氧 性呼吸衰竭…，其发病机制复杂，尚未完全阐明， 中重度ＡＲＤＳ在院病死率仍高达４０％＿２＿。肺损伤的早 期应答是固有免疫细胞介导的内皮一上皮屏障损伤导 致富含蛋白的水肿液积聚于肺间质和肺泡，同时内 皮活化和微血管损伤也进一步促进屏障破坏 ，促 和厚朴酚通过激活线粒体依赖的Ｓｉｒｔ３／ＡＭＰＫ￣，径减轻脂多糖所致的急性呼吸窘迫综合征陈兰，等 进ＡＲＤＳ进展。因此，早期阻断肺微血管内皮细胞 （ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ，ＰＭＶ￣Ｃｓ）和 内皮屏障损伤对减轻ＡＲＤＳ￣组织损伤、改善预后有 重要意义。 和厚朴酚（ｈｏｎｏｋｉｏｌ，ＨＫＬ）提取于木兰科植物（厚 朴）的根、树皮，是中药厚朴的主要活性成分之～。 中药厚朴具有抗氧化、抗炎、抗血管损伤等多重效 用，且安全有效，在中医药领域沿用至今 ｊ。研究ｌ５ 发现ＨＫＬ在脂多糖（１ｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ）或盲肠结 扎穿￣ｋ（ｃｅｃａｌ ｌｉｇａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｎｃｔｕｒｅ，ＣＬＰ）诱导的急性 肺损伤中具有抗炎、抗氧化应激、减轻肺水肿、提 高生存率的作用，但其作用机制并未进一阐明。此 外，Ｏｊｕ等＿６ 的研究表明ＨＫＬ在动脉粥样硬化的细胞 模型中，可通过抑制穿透素３（ｐｅｎｔｒａｘｉｎ ３，ＰＴＸ３）过 表达而修复内皮功能障碍。Ｐｉｌｌａｉ等 的研究证实ＨＫＬ 可作为线粒体蛋白Ｓｉｒｔ３的直接激动剂，逆转小鼠心肌 肥厚。因此，推测ＨＫＬ可通过线粒体依赖的Ｓｉｒｔ３／腺 苷酸活化蛋白激酶（ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ，ＡＭＰＫ）途径保护肺微血管内皮，减 轻炎症反应和肺水肿，从而改善ＡＲＤＳ预后。本研 究从ＡＲＤＳ／］ｘ鼠模型和人肺微血管内皮细胞ｈｕｍａｎ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ，ＨＰＭＥＣｓ）两个 层面探讨ＨＫＬ对ＬＰＳ所致 Ｄｓ的肺微血管作用及其可 能的机制。 ｌ材料与方法 １．１动物和细胞 ４０只健康ＳＰＦ级雄性ＣＳ７ＢＬ／６Ｊ／］＇，鼠，８－１０周龄， 体重为２０～２５ ｇ，购自重庆医科大学动物实验中心， 并饲养于通气的龛笼内，提供标准饮食和水。 ＨＰＭＥＣｓ购自美国模式培养物集存库（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，ＡＴＣＣ）。细胞培养条件：采用含 １０％胎牛血清、１％青霉素和链霉素的高糖ＤＭＥＭ培养 基，在５％ＣＯ，，３７℃恒温培养箱中培养。 １．２试剂 伊文思蓝、甲酰胺、二甲基亚砜（ｄｉｍｅｔｈｙ１． ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ，ＤＭＳＯ）、ＬＰＳ和尼克酰胺（ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ， ＮＡＭ）购自美国Ｓｉｇｍａ公司；ＨＫＬ和混合抑制剂 （ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｃ，ＣＭＣ）购自美国Ｓｅｌｌｅｃｋ Ｃｈｅｍ公司； 细胞计数试剂盒（ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔｉｎｇ ｋｉｔ．８，ＣＣＫ一８）购 自日本Ｄｏ１ｉｎｄｏ公司；ＲＩＰＡ裂解液、二喹啉甲酸 （ｂｉｏｉｎｃｈｏｎｉｎｉｃ ｆｏｒｍｉｃ ａｃｉｄ，ＢＣＡ）法蛋白浓度测定试剂 盒、十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（ｓｏｄｉｕｍ ｄｏｄｅｃｙｌ ｓｕｌｆａｔｅ—ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ， ＳＤＳ—ＰＡＧＥ）凝胶配胶试剂盒及超敏化学发光液购 自北京碧云天生物技术研究所；髓过氧化物酶 （ｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ＭＰＯ）检测试剂盒购自南京建成 工程生物研究所；胎牛血清购自美国Ｇｉｂｉｏ公司， 青霉素、链霉素和高糖ＤＭＥＭ购自美国Ｈｙｃｌｏｎｅ公 司。Ｓｉｒｔ３，ＡＭＰＫ，Ｂｃｌ一２，Ｂａｘ多克隆抗体购自美国 Ｂｉｏｗｏｒｌｄ公司；ｐ－ＡＭＰＫ，ｃａｓｐａｓｅ３，ｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓｅ一３单 克隆抗体购自美国ＣＳＴ公司；辣根过氧化物酶标记的 山羊抗兔ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）购自北京中杉金桥生物技术有限 公司。 １．３仪器 二氧化碳恒温培养箱购自美国Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ 公司；９６孑Ｌ培养板和多功能酶标仪购自美国Ｂｉｏ— Ｒａｄ公司；分光光度计购自北京百泰克生物技术 有限公司；ＤＹＹ一６Ｃ电泳仪购自北京六一仪器厂； ＣｈｅｍｉＤｏｃＴＭ成像系统购自美国Ｂｉｏ—Ｒａｄ公司。 １．４方 ．去 １．４．１小鼠ＡＲＤＳ模型的构建 将４ｏ只小鼠采用随机数字表法分为对照组（Ｃｏｎ 组）、ＬＰＳ干预组（ＬＰｓ组）、ＬＰｓ＋ＨＫＬ干预组（ＨＫＬ 组）、ＬＰＳ＋ＨＫＬ＋ＮＡＭ干预组（ＮＡＭ组），每组ｌ０只。 腹腔注射４％水合氯醛（ｏ．１ ｍＬ／１０ ｇ）麻醉小鼠。１８ Ｇ留 置针行气管插管建立人工气道，ＬＰＳ组、ＨＫＬ组、 ＮＡＭ组向气管内滴注５０｝ｌＬ无菌ＬＰＳ溶液（５ ｍｇ／ｋｇ）， Ｃｏｎ组予以５０ Ｌ无菌ＰＢＳ溶液。３０ ｍｉｎ后ＨＫＬ组腹腔 注射ＨＫＬ溶液（ｓ ｍｇ／ｋｇ），ＮＡＭ组腹腔注射ＨＫＬ溶液 （５ ｍｇ／ｋｇ）￣ＮＡＭ溶液（５ ｍｇ／ｋｇ），Ｃｏｎ组和ＬＰｓ组给 予等量的含０．１％ＤＭＳＯ的ＰＢＳ溶液。２４ ｈ后，深度麻 醉、放血、处死小鼠。 １．４．２小鼠肺组织ＨＥ染色及病理评分 取左下肺组织，４％多聚甲醛固定７２ｈ，切成５岫 石蜡切片，ＨＥ染色后光镜下观察。根据以下肺损伤 评分标准 评分：肺泡间隔增厚；气管旁或血管周围 中性粒细胞浸润；肺泡腔蛋白水肿液渗入；透明膜 形成。依据病变轻重程度评０～３分（ｏ分：无病变或非 常轻微；１分：轻度病变；２分：中度病变；３分：重 度病变），４项评分总和反映肺组织损伤的严重程度。 １．４．３ ＢＡＬＦ细胞计数及蛋白含量测定 小鼠处死后，暴露气管和胸部，气管近端做一 个ｖ形切口，用１ ｍＬ无菌ＰＢＳ溶液反复灌洗肺组织３ 次，并确保回收率大于８０％。将收集的ＢＡＬＦ于４℃， １２ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心１０ ｍｉｎ，取上清液，按ＢｃＡ法检测蛋 白浓度试剂盒说明书测定５６２ ｎｍ处ＢＡＬＦ上清液的吸 光度值。细胞沉渣取１０ Ｌ涂片后予以瑞氏一吉姆萨染 色，光镜下计数中性粒细胞；剩余细胞沉渣以５０ ＰＢＳ溶液重悬，使用细胞计数板计数ＢＡＬＦ中的细胞 总数。 １．４．４肺湿干重比 将未灌洗的新鲜肺组织置精密电子天平上称 重，即湿重（ｗ），再置于８０℃恒温烤箱７２ ｈ至恒重并 称重，即干重（Ｄ）。计算肺ｗ／Ｄ值。 １．４．５伊文思蓝检测肺微血管渗透性 小鼠处死前１ ｈ，经尾静脉注射２％伊文思蓝 （１．２Ｓ ｍＬ／ｋｇ），１ ｈ后经颈动脉取抗凝血ｌ ｍＬ，离心 取血浆备用，放血处死小鼠，暴露胸腔，用生理盐 水灌洗肺血管至左心房无血性液体流出，收集肺组 织，称重后置８０℃恒温烤箱内烘烤７２ ｈ至恒重并称 重。每１００ ｍｇ干重肺组织｝ＪＨ￣３ ｍＬ甲酰胺，３７ 水 浴２４ ｈ，３ ０００ ｒ／ｍｉｎ离 ６３０ ｍｉｎ，吸取上清，分光光 度计于６２０和７４０ ｎｍ波长处测定上清及血浆的吸光度 值。肺微血管渗透性以伊文思蓝渗漏指数ｅｖａｎｓ ｂｌｕｅ ｌｅａｋｉｎｇ ｉｎｄｅｘ，ＥＬＩ）来表示。ＥＬＩ＝肺组织伊文思蓝含量／ （肺干重×血浆伊文思蓝含量）。 １．４．６肺组织ＭＰｏ测定 每１００ ｍｇ肺组织剪碎后］ＪＮ／ｈ￣１ ｍＬ ＰＢＳ溶液，冰 上充分研磨后短暂超声破碎，４℃，１２ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心 １５ ｍｉｎ，收集上清液。按照ＭＰＯ检测试剂盒说明书操 作，分光光度计测定４６０ ｎｍ波长处吸光度值。按以下 公式计算：肺组织匀浆ＭＰＯ活性＝ｆ测定样本吸光度 值一空白样本吸光度值）／（１１．３ｘ０．０５ｘ０．２）。 １．４．７ ＣＣＫ－８检￣＇ｉＨＫＬ对ＨＰＭＥＣｓ活性的作用 细胞实验中，将ＨＰＭＥＣｓ分为对照组（Ｃｏｎ组）、 ＬＰＳ干预组（ＬＰＳ组）、ＬＰｓ＋ＨＫＬ干预组（ＨＫＬ组）、 ＬＰＳ＋ＨＫＬ＋ＮＡＭ干预组（ＮＡＭ组）和ＬＰＳ＋ＨＫＬ＋ＣＭＣ 干预组（ＣＭＣ组）。每孔按１×１０４个细胞密度接种９６ 孑Ｌ板，每组设４个复孔，培养２４ ｈ。ＨＫＬ细胞毒性 实验：分别加入终浓度为０，ｏ．６２５，１．２５０，２．５００， ５．０００，１０．０００，５０．０００￣ｔｍｏｌ／Ｌ ＨＫＬ ２４ ｈ。ＨＫＬ细胞增 殖实验：加入５［ｉｍｏｌ／Ｌ ＨＫＬ或５ ｍｍｏｌ／Ｌ ＮＡＭ预处理 ２ ｈ后，予以１００ ｎｇ／ｍＬ ＬＰＳ继续培养２４ ｈ。每孔加入 ｌ０ ＣＣＫ－８试剂，继续培养２ ｈ，多功能酶标仪测定 ４５０ ｎｍ波长处每孔吸光度值。 １．４．８ ＷｅｓｔｅｒｎｇＰ迹检测肺组织ＨＰＭＥＣｓ凋亡相关蛋白、 Ｓｉｒｔ３和ＡＭＰＫ的表达 将肺组织或收集的细胞沉渣加入适量的ＲＩＰＡ强 效裂解液，冰上裂解３０ ｍｉｎ，充分研磨或短暂超声破 碎后，４℃，１２ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心１５ ｍｉｎ，收集上清液。 ＢＣＡ法测定蛋白浓度，每孑Ｌ加入３０ ｌｘｇ蛋白样品，１２％ ＳＤＳ—ＰＡＧＥ分离蛋白质，使用湿转法转印至ＰＶＤＦ膜 上，以５％脱脂奶粉封闭２ ｈ，一抗４ ｃＣ孵育过夜，再 以辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）室温孵 育Ｉ ｈ，采用超敏化学发光法曝光。其中，细胞实验 检测的分组同１．４．７。 中南大学学报（医学版） ２０１８ ４３（１０）ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｓｕｍｅｄ．ｏｒｇ １．５统计学处理 采Ｊ￣］Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ５．０软件进行数据分析和作 图。计量资料以均数±标准差（ ±ｓ）表示，３组或３组以 上的两组问比较采用ＡＮＯＶＡ单因素方差分析，随后 检验采用Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ法，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。 ２结果 ２．１ ＨＫＬ减轻ＬＰＳ导致的肺损伤 ＨＥ染色肺组织病理切片光镜下可见：Ｃｏｎ组肺 组织的肺泡结构完整，肺泡间隔均一，未见 血、 水肿、炎性细胞浸润；ＬＰＳ组肺泡结构破坏，肺泡间 隔明显增厚，出血、水肿明显，并伴大量炎性细胞 浸润；ＨＫＬ组肺泡结构可见肺泡间隔轻度增厚，伴 轻度出血、水肿和炎症细胞浸润，较ＬＰＳ组肺损伤评 分明显降低（ｐ＜０．０１）；ＮＡＭ组的肺泡结构依稀可见， 肺泡间隔中度增厚，伴中度出血、水肿、炎性细胞 浸润，较ＨＫＬ组肺损伤评分增高（Ｐ＜０．０Ｓ；图１Ａ， ｌＢ）。肺ｗ／Ｄ值表明：与Ｃｏｎ组比较，ＬＰＳ组肺Ｗ／Ｄ值 显著增高（ｐ＜０．０５）；ＨＫＬ组肺Ｗ／Ｄ值较ＬＰＳ组明显下 降（ｐ＜ｏ．０Ｓ，图１Ｃ）。ＢＡＬＦ蛋白浓度、细胞总数和中 性粒细胞计数结果显示：与Ｃｏｎ组比较，ＬＰＳ组ＢＡＬＦ 蛋白浓度、细胞总数和中性粒细胞计数显著增高（均 Ｐ＜Ｏ．０１）；ＨＫＬ组ＢＡＬＦ蛋白浓度、细胞总数和中性粒 细胞计数较ＬＰＳ组显著降低（均Ｐ＜０．Ｏ１）；ＮＡＭ组ＢＡＬＦ 蛋白浓度、细胞总数和中性粒细胞计数较ＨＫＬ组明显 降低（均Ｐ＜０．０５，网ｌＤ～１Ｆ）。与Ｃｏｎ组比较，ＬＰＳ组肺 组织ＭＰＯ活性显著升高（ｐ＜ｏ．０１）；ＨＫＬ组ＭＰＯ活性较 ＬＰＳ组显著降低（ｐ＜０．０１）；ＮＡＭ组ＭＰＯ活性较ＨＫＬ组 显著升高（Ｐ＜０．０１，图ｌＧ）。 ２．２ ＨＫＬ减轻ＬＰＳ导致的肺微血管高渗透性 伊文思蓝实验结果表明：与Ｃｏｎ组比较，ＬＰＳ组 肺微血管渗透性明显增加（Ｐ＜０．０１）；ＨＫＬ组肺微血管 渗透性较ＬＰＳ组显著降低（Ｐ＜０．０１）；ＮＡＭ组肺微血管 渗透性较ＨＫＬ组明显升高（ｐ＜ｏ．０５，图２）。 ２．３ ＨＫＬ对ＨＰＭＥＣｓ活性的作用 ＣＣＫ一８细胞毒性实验结果表明：不同浓度 ＨＫＬ（０一Ｓ０．０００［．ｔｍｏｌ／Ｌ）对ＨＰＭＥＣｓ无明显毒性作用 （Ｐ＞０．０５）。选取Ｓ．０００ Ｆｍｏｌ／Ｌ ＨＫＬ和２４ ｈ作为后续实验 的干预浓度和时间点（图３Ａ）。ＣＣＫ ８细胞增殖实验 的结果表明：与Ｃｏｎ组比较，ＬＰＳ组ＨＰＭＥＣｓ存活率 显著降低；与ＬＰＳ组比较，ＨＫＬ组细胞存活率显著升 高（ｐ＜ｏ．ｏ１）；ＮＡＭ组较ＨＫＬ组细胞存活率明显降低 （Ｐ＜Ｏ．ＯＳ，图３Ｂ）。 ！ 兰！ 竺竺 垫 依赖的ｓｉｒｃ３／ＡＭｐＫ途径减轻脂多糙所致的急性Ⅱ乎［Ｊ殷窘迫综合征 、 ．等 ＼ １１ ∞口ｌｓＩＩ 趸 【ｌ Ｅ｜ｓ一一８ｂ＿Ｉ×） ０ Ｌ一 一 Ｌ—Ｏ Ｏ Ｌ一０ Ｏ 一 ０ 一●■■ 一一血◇ 一●■ ～●■ １ 曲 一童 ｒ Ｚ 一 ∞ Ｉｓ至 ２芎ｕＺ ＼ Ｃ ，－ａ 一 Ⅲ．∞一一８ ｂ０＿【ｘ） 一） ） ） ＿） 一 ） ｕ。 Ｌ一 图１ ＨＫＬ减轻ＬＰＳ导致的肺损伤 一 一 ｎ 一●■■ 一一Ⅱ◇ －１－一 口◇ 一直 卜．｜■■ ｌｕＪｄ ∞ Ｄ ）／ Ｌ一一。ｕ 一ｌ ，． ∞．鲁．．。ｆ－１．一．＼． ．。－．Ｉ ＾．．．Ｌ．－０＿． ＿．口 ．苫Ｌ．．∞． Ｌ。广 （Ｉ Ｃ， ． Ｆｉｇｕｒｅ １ ＨＫＬ ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＬＰＳ Ａ：Ｐ ｈ。ｌ。ｇｉｃａｌ ｃｈａ“ｇｅｓ。ｆｔｈｅ ｌｕｎｇ ｔｉｓｓｕｅｓ（ＨＥ，×２００）；Ｂ：ＣｏｍｐａｒａｔｉＶｅ ａｎａｌｙｓｉｓ。ｆｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ ｓｃｏｒｅ；Ｃ：Ｌｕ“ｇ Ｗ／Ｄ ｒａｃｉ。；Ｄ：Ｐｒｏｔｅｉｎ ｃ０ｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｉｎ ＢＡＬＦｊ Ｅ：ＴｏｔａＩ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ＢＡＬＦ；Ｆ：Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ ｉｎ ＢＡＬＦ；Ｇ：ＭＰＯ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｌｕｎｇ ｔｉｓｓｕｅｓＰ＜０．０５．抖Ｐ＜０．０１ ＿●■■ Ｉ－●■■ Ｉ１ ｒ 七 一 ！臼 一ｌ二『 ◇ 蛊２０ １Ｏ １．２ 一ＩＪ －琶０．９ ０ ０．６２５ １．２５０ ２．５００ ５．０００ １０．０００５００００ ．’ ０．６ 爱 亏０．３ ０ ＨＫＬ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ／（￣ａｍｏｌ·Ｌ‘） １．５ Ａ Ｏ １．０ 兰０．５ 图２ ＨＫＬ减轻ＬＰｓ导致的肺微血管高渗透性 Ｆｉｕｒｅ ２ ＨＫＬ ａｔｇｔｅｎｕａｔｅｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＬＰＳ Ｐ＜０．０Ｓ。”Ｐ＜０．０ ｌ Ｕ Ｏ 图３ ＨＫＬ对ＨＰＭＥＣｓ活性的作用 Ｆｉｇｕｒｅ ３ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆＨＫＬ ｏｎ ＨＰＭＥＣｓ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａ：Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｔｅｓｔ ｏｆ ＨＫＬ ｏｎ ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ ＨＰＭＥＣｓ：Ｂ Ｈｉｓｔｏｇｒａｍ ｏｆｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ ｏｆ ＨＰＭＥＣｓ ｉｎ ｔｈｅ ４ ｇｒｏｕｐｓＰ＜０．０５ ． Ｐ＜０．０ｌ 巾南大学学｛｝｛（阪 、 ：舨），２０１８，４３（１０）ｈｔｔｐ：／／ｖ，￣ｒｗ，ｃｓｕｍｅｄ．ｏｒｇ ２．４ ＨＩ 抑制凋亡相关蛋白表达 显著升高．Ｂｃｌ。２／Ｂａｘ比ｆｌｌｆ显著降低；ＨＫＬ ［ｃｌｅａｖｅｄ ｆ＇ｕ ｌ—ｕ＿｝０ ０Ｈ ｃａｓｐａｓｅ一３／ｃａｓｐａｓｅ．３比ｆ｜ｉ＿较ＬＰＳ组 著降低（Ｐ＜０．０１）， 鲥织Ｗｅ ｓｔｅ ｒｎ印迹结果 永：与Ｃｏｎ绀比 较．ＬＰｓ组ｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓｅ．３／ｃａｓｐａｓｅ一３比值明 升ｉ岛 Ｂｃｌ一２／Ｂａｘ比值较ＬＰｓ ｕ＼ ．ｕ∞ ∞ ｕ 著升高（Ｐ＜０．０１）：ＮＡＭｅ［【 ：升ｆ （ｐ＜０．０ １）；ＨＫＬｆ【Ｉｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓｅ一３／ｃａｓｐａｓｅ．３比值较 ＬＰＳｆＨ ４Ｂ） ｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓｅ一３／ｃａｓｐａｓｅ一３比值较ＨＫＬ￣Ｉ【 降低（Ｐ＜０．０１）；ＮＡＭ组ｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓｅ．３／ 胞 验ｆｌ１．Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹 爪（ ４Ｃ～４Ｅ）： （Ｐ＜Ｏ．Ｏ１），Ｂｃ１．２／Ｂａｘ［Ｌ｛（［１较ＨＫＬ￣［１叫 降低（Ｐ＜０．０５）： ＣＭＣ组ｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓｅ ３／ｃａｓｐａｓｅ一３比值较ＨＫＬ 允 ｃａｓｐａｓｅ．３比 较ＨＫＬ组明 升高（ｐ＜ｏ．０５； ４Ａ， 与ｃ０ｎ绀比较，ＬＰＳ￣Ｈｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓｅ。３／ｃａｓｐａｓｅ一３比俩 显升高（Ｐ＞Ｏ．０Ｓ），Ｂｃｌ一２／Ｂａｘ比值较ＨＫＬ） （Ｐ＜０．０１）． 降低 ◇ ◇ Ｂｃｌ ２ Ｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓｅ一３ Ｃａｓｐａｓｅ一３ ｎ ｘ鬯 （［１ｅａｖｅ ｐａｓｅ ３匡 Ｃａｓｐａ一３匿 Ａ 嘲． ＿！ 圈 、 Ｂ－ａｃｔｉｎ ◇◇ Ｂ ￣－ａｃｔｉｎ ｉ ０ 。 Ｅ 图４ Ｈｌ 抑制凋亡相关蛋白表达 Ｆｉｇｕｒｅ ４ ＨＫＬ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ Ａ：Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓｅ一３ ａｎｄ ｃａｓｐａｓｅ一３ ｉｎ ｌｕｎｇ ｔｉｓｓｕｅｓ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ；Ｂ：Ｑｓｌａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｔｈｅ ｂａｎｄ ｉｎｔｅｎｓｉｔｉｅｓ ｆｏｒ ｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓｅ，３／ｃａｓｐａｓｅ一３ｊ Ｃ：Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓｅ一３，ｃａｓｐａｓｅ一３，Ｂｃｌ一２ ａｎｄ Ｂａｘ ｉｎ ＨＰＭＥＣｓ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ；Ｄ，Ｅ：Ｑ＿ｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆｔｈｅ ｂａｎｄ ｉｎｔｅｎｓｉｔｉｅｓ ｏｒｆ ｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓｅ．３／ｃａｓｐａｓｅ．３（Ｄ）ａｎｄ Ｂｃｌ一２／Ｂａｘ（Ｅ）． Ｐ＜Ｏ．ＯＳ， Ｐ＜０．０ １ ２．５ Ｓｉｒｔ３／ＡＭＰＫ￣路参与ＨＫＬ的保护作用 Ｗｅｓｔｅｒｎ￣］］迹结果表明：与Ｃｏｎ组比较．ＬＰＳｆｌｌ小 ｑＣｏｎ￣Ｈ比较，ＬＰＳｆＩＩＳｉｒｔ３表达和ｐ．ＡＭＰＫ／ＡＭＰＫ［Ｌ 酱降低；ＨＫＬｆｌＩＳｉｒｔ３丧达和Ｉｐ．ＡＭＰＫ／ＡＭＰＫ比１＿Ｉｆｉ＝较 ＬＰＳ组 升高（Ｐ＜Ｏ．０１）；ＮＡＭ￣Ｓｉｒｔ３表达较ＨＫＬｆＨ 明 降『氐（Ｐ＜０．０５），ｐ－ＡＭＰＫ／ＡＭＰＫ比俩较ＨＫＬ￣［ 著降低（Ｐ＜０．０１）；ＣＭＣ｝Ｉ【Ｓｉｒｔ３表达＿币Ｉ１ｐ—ＡＭＰＫ／ＡＭＰＫ 比值较ＨＫＬ绀｛ 降低（ｌＰ＜０．Ｏ１，』 ５ｃ～５Ｅ＿） 鼠肺组织标本Ｓｉｒｔ３的表达显著降低；与ＬＰＳ组比较． ＨＫＬ组Ｓｉｒｔ３表达显著升高（Ｐ＜ｏ．Ｏ１）；与ＨＫＬ组比较． ＮＡＭ组Ｓｉｒｔ３表达明显降低（Ｐ＜０．０５；图５Ａ，５Ｂ）． 予以 ＮＡＭ和ＣＭＣ干预ＨＰＭＥＣｓ，ｗｅｓｔｅｒｎ印迹结果 永： ｆ『ＩＪ 计 酚通过激｝ 线粒体依赖的ｓ－ｒｔ３／ＡＭＰＫ途径减轻脂多糖所敛的急性呼［１垃窘迫综合 陈 ．等 １．０ ０ 专Ｏ ８ 墨 善 ｒｔ 暑０．６ ０．４ 宅０．２ Ｏ ＡｂｌＰＫ匡 ｉ ＡＭＰＫ 璺 ｓ ｒｔ３圈 ￣－ａｃｔｍ Ａ ◇ ‘ Ｂ ０．４ 詈· 。 ｔ Ｅ 图ｓ Ｓｉｒｔ３／ＡＭＰＫ￣路参与ＨＫＬ的保护作用 Ｆｉｇｕｒｅ Ｓ Ｓｉｒｔ３／ＡＭＰＫｐａｔｈｗａｙｗａｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｏｆＨＫＬ Ａ：Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ Ｓｉｒｔ３ ｉｎ ｌｕｎｇ ｔｉｓｓｕｅｓ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ；Ｂ：Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｂａｎｄ ｉｎｔｅｎｓｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｓｉｒｔ３ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌ；ｃ： Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｆｏｒ Ｓｉｒｔ３，ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｏｔａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆＡＭＰＫ ｉｎ ＨＰＭＥＣｓ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ；Ｄ，Ｅ：Ｏｔｌａｏｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ，ｔｈｅ ｂａｎｄ ｉｎｔｅｎｓｉｔｉｅｓ ｏｒｆ Ｓｉｒｔ３（Ｄ）ａｎｄ ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆｔｈｅ ｂａｎｄ ｉｎｔｅｎｓｉｔｉｅｓ ｆｏｒ ｐ－ＡＭＰＫ ｔｏ ＡＭＰＫ（Ｅ） Ｐ＜０．０５， Ｐ＜０ ０１ ３讨论 ＡＲＤＳ是危暖疵患者呼吸衰竭的主要 ，以 ｆ『安腺嘌呤二核 酸（ｎｉＣＯｔｉｎａｍｉｄｅ ａｄｅｎｉＩ１ｅ ｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ． ＮＡＤ ）依赖的组蛋白去乙酰化酶． ｒ 仃 ｊ：线 体 少 仔 于细胞质或细胞恢ｒＩ１．冬 ｊｆＪ【怵抗粳 急性起病、气体交换功能受损、￣ｌｉｂｉｌｌＪ，｛应性降低和肺 水肿形成为特点 ｊ，其主要的发病机制是肺上皮和 Ｉ 僻『人Ｊ』叟，皿暖损伤．导致肺泡毛细¨ＩＬ符膜通透性增 尚＿Ｉ。Ｊ 肺叭管 皮在结构、形态、功能上有别丁全 ，Ｉ『ｌ【僻，其暴露丁高氧分¨ ｎｊ 对誓低压的ｍ流Ｉｎ｝。 肺 管内皮稳念，人衡导致以抗炎表型为主的内皮细 老、渊 线粒体合成和代谢及氧化啦激等过 ｄｌＭＰＫ及其信ｕ｜网络参与机体正常能ｆｌ 代鲥，对抗Ｊ、 激反应，促进机体存活 】 已有研究 。＿｝Ｊｌ ：ｓｉｒｔ３·ｊ ＡＭＰＫＩｈ］存 正反馈旧路，可蒯 Ｉ噬过 ，促进Ｉ ｆ 藜芦醇对 噬细胞应激的保护作川Ｊｌ 线粒体是细胞进行有氧呼『Ｉ殷的 。 场『ｉＪｉ＝，Ｍ 时也是重要的 激感受器，参 州１ 胞捌ＴＬ 过 。胞活化为健炎表 ，从 促进肺实质炎症反应，临 ｆ 走脱为ＡＲＡ）Ｓ‘１ ２］ 近 来．促进内皮细胞再生有 成 治疗ＡＲＤＳｆｌ￣，ｄ新策略ｌＩ 、、研究ｌｌ 。 发现： 以 Ｌ Ｋ 子（『』ｆ】肝乡ｆＨ胞生长【太ｌ予、『ｆｊ细胞生长『大ｌ子）可促 进ＡＲＤＳ动物模型Ｊ：皮和Ｉ大Ｊ皮细胞阿，ｔ：－；骨髓来源的 ｆ：细胞ｉｔ＜４１－向Ｊ 皮细胞和１人Ｊ皮细胞分化的潜能，静 Ｂｃｌ一２家族货白存在ｌ丁线粒ｆ＃ｇｂ Ｊｔ￣：．参与州 促州Ｉ、 线粒体的功能。抗凋亡蛋白Ｂｃ１．２ 仪抑；ｔｉ４ｃａｓｐａｓｅ依 赖的捌亡，还抑制氧化和缺氧引起ｆ１９ Ｊｑ； 蛋ｈＢａｘｆｌｔ胞质向线粒体膜转位，诱导川胞质乡｝¨胞 素Ｃ释放和细胞凋 ＿２ 。Ｃａｓｐａｓｅ家族址ｆ』ｌ起捌广：的ｊ｜ 要成分，其中效应器如ｃａｓｐａｓｅ一３ｊ－ 通过 动 （＆【１ 脉输入骨髓米源的十细胞 ｒ亡月促进肺损伤的血管内 戍ｆ ，卜，¨前尚需要大 研究 ｌ 实 、 ｃａｓｐａｓｅ．９）蛋白裂解而活化，促进细胞ｌ』、】靶ｆ，ｊ 降 ｉＯｉ导致细胞死ｒ＝ 。ＩＪ此，线 体介 的细胞捌Ｉ大’： ＨＫＬ址提取于［ｆ１药Ｖ４ｂ根、树Ｊ支的中药单体， Ｊｔ．．４ｆ多承约理特性一近年来，ＨＫＬ７Ｆ』皿管方面的研 究逐渐深入 研究［１６ １７］表Ｉ Ｊ』】：ＨＫＬ町抑制中性粒细胞 没涧和活性氧产生ｍｊ减轻火鼠呐局部缺血 灌注损 伤，ＨＫＬ还呵抑制ＮＡＤＰＨ氧化帆来源ｆｌ＜ｍｏｓ氧化应 维持细胞生理或病理过程巾至火 体内实验通过采川气管内捅镎ｆｒ ￣，ｆｆ ｉ！ＬＰＳ７｛：ｆ液构缱 ＡＲＤＳＩ］ｘ鼠模 来模｝￣ＡＲＤＳ发瘸过 ：ｆ小外 验果川 ＨＰＭＥＣｓ进·步研究ＨＫＬ对肺微 ：１人Ｊ皮的ｆ１：ＪＩ Ｊ技机 激介导的核 子ＫＢ（ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ ＫＢ，ＮＦ．ＫＢ）相父信号 ｊ！！ｉ路ｆｆ】人脐静脉内皮细胞州 Ｓｉｒｔ３为第１ＩＩ类娴酰 制。小研究的动物实验发现：ＨＫＬ￣］ｌＩＪ＋７１［ｆ；ｔ ｄＤ！伤较 ＬＰＳｔＩｉ明 减轻，肺Ｗ／Ｄ值降低，ＢＡＬＦＩＩｌ１ ＿ｔ＇ｔ：－粒细胞 １０８２ 巾南大学学报（医学版），２０１８，４３（１０）ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｓｕｍｅｄ．ｏｒｇ 数、蛋白含量降低，肺微血管渗透性也明显降低； ＮＡＭ可部分阻断ＨＫＬ的作用。细胞实验表明ＨＫＬ对 细胞无明 毒性作用，可促进ＬＰＳ干预的ＨＰＭＥＣｓ 存活，抑制细胞凋亡；Ｓｉｒｔ３￣特异性抑制￣１］ＮＡＭ和 ＡＭＰＫａ特异性抑制剂ＣＭＣ干预进一步表明ＨＫＬ对 ［１２］ Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ ＧＡ Ｊ Ａｌｂｅｒｔｉｎｅ ＫＨ，Ｃａｒｖｅｔｈ ＨＪＪ ｅｔ ａ１．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎｉｎＡＲＤＳ［Ｊ］．Ｃｈｅｓｔ，１９９９，１１６（１ ｓｕｐｐ１）：１８—２４． ［１３］ Ｍｉｎａｍｉｎｏ Ｋｏｍｕｒｏ Ｉ．Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆｔｈｅ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ ａｓ ａ ｎｏｖｅｌ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｓｔｒａｔｅｇｙ ｆｏｒ ａｃｕｔｅ ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．Ｊ Ｃｌｉｎ ＩｎｖｅｓｔＪ ２００６， １ ｌ６（９）：２３１６ ２３１９． ＨＰＭＥＣｓ的保护作用可能是通过线粒体依赖的Ｓｉｒｔ／ ＡＭＰＫ途径。 ［１４］ Ｗａｒｅ ＬＢ，Ｍａｔｔｈａｙ ＭＡ．Ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ ａｎｄ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｌｕｎｇ：ｒｏｌｅｓ ｉｎ ｌｕｎｇ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｒｅｐａｉｒ［Ｊ］． 综上所述，ＨＫＬ可减轻ＬＰＳ导致的肺部炎症损 ＡｍＪ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ，２００２，２８２（５）：Ｌ９２４一Ｌ９４０． ［１５］ Ｋｒａｕｓｅ ＤＳ，Ｔｈｅｉｓｅ ＮＤ，Ｃｏｌｌｅｃｔｏｒ ＭＩ Ｍｕｌｔｉ—ｏｒｇａｎ，ｍｕｌｔｉ—ｌｉｎｅａｇｅ 伤和ＨＰＭＥＣｓ凋亡，其作用机制可能与Ｓｉｒｔ３和 ＡＭＰＫ依赖的线粒体途径有关。 ［１６］ ｅｎｇｒａｆｔｍｅｎｔ ｂｙ ａ ｓｉｎｇｌｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ—ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ［Ｊ］．ＣｅｌｌＪ ２００１ １０５（３）：３６９—３７７． Ｌｉｏｕ ＫＴ，Ｓｈｅｎ ＹＣ，Ｃｈｅｎ ＣＦ，ｅｔ ａ１．Ｈｏｎｏｋｉｏｌ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ｒａｔ ｂｒａｉｎ ｆｒｏｍ ｆｏｃａｌ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ ｂｙ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ 参考文献 【１］ Ｓｗｅｅｎｅｙ ＲｉＭ，ＭｃＡｕｌｅｙ ＤＦ．Ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｄｉｓｔｒｅｓｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ［Ｊ］． Ｌａｎｃｅｔ，２０１６，３８８（１００５８）：２４１６．２４３０． ［２］ Ｖｉｌｌａｒ ＪＪ Ｂｌａｎｃｏ ＪＪ Ｋａｃｍａｒｅｋ ＲＭ．Ｃｕｒｒｅｎｔ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ａｎｄ ｏｕｔｃｏｍｅ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ， ２００３，９９２（２）：１５９—１６６． ［１７］ Ｓｈｅｕ ＭＬ，Ｃｈｉａｎｇ ＣＫ，Ｔｓａｉ ＫＳ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＮＡＤＰＨ ｏｘｉｄａｓｅ— ｒｅｌａｔｅｄ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ—ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｙ ｈｏｎｏ￣ｏｌ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｈｉｇｈ ｇｌｕｃｏｓｅ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｈｕｍａｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｆｒｅｅ ＲａｄｉｃＢｉｏｌＭｅｄ，２００８，４４（１２）：２０４３—２０５０． ［１８］ Ｓｏｓｕｌｓｋｉ ＭＬ，Ｇｏｎｇｏｒａ Ｒ，Ｆｅｇｈａｌｉ—Ｂｏｓｔｗｉｃｋ Ｃ ｅｔ ａ１．Ｓｉｒｔｕｉｎ ３ ｏｆｔｈｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｄｉｓｔｒｅｓｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ ２０１６，２２（１）：１－６． ［３］ Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＢＴ，Ｃｈａｍｂｅｒｓ ＲＣ，Ｌｉｕ ＫＤ．Ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｄｉｓｔｒｅｓｓ ｄｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｉｆｂｒｏｓｉｓ［Ｊ］ｌＪ Ｇｅｒｏｎｔｏｌ Ａ Ｂｉｏｌ Ｓｃｉ Ｍｅｄ Ｓｃｉ ２０１ ７Ｊ ７２（５）：５９５ ６０２． ［１９］ Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇ ＧＲ，Ｋｅｍｐ ＢＥ．ＡＭＰＫ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｒｅｖ，２００９，８９（３）：１０２５．１０７８． ｓｙｎｄｒｏｍｅ［Ｊ］．Ｎ ＥｎｇｌＪ Ｍｅｄ，２０１７ ３７７（６）：５６２．５７２． ［４］ Ｃｈａｏ ＬＫ，Ｌｉａｏ ＰＣ Ｈｏ ＣＬ，ｅｔ ａ１．Ａｎｔｉ—ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｈｏｎｏｋｉｏｌ ｔｈｒｏｕｇｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ Ｃ，ｍｉｔｏｇｅｎ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ，ａｎｄ ｔｈｅ ＮＦ—ｋａｐｐａＢ ｐａｔｈｗａｙ ｔｏ ｒｅｄｕｃｅ ＬＰＳ—ｉｎｄｕｃｅｄ ［２ｏ］ Ｄｕａｎ ｗＪ，Ｌｉ ＹＦ，Ｌｉｕ ＦＬ，ｅｔ ａ１ Ａ ＳＩＲＴ３／ＡＭＰＫ／ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｎｅｔｗｏｒｋ ｏｒｃｈｅｓｔｒａｔｅｓ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｒａｎｓ．ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ ｉｎ ｓｔｒｅｓｓｅｄ ＴＮＦ—ｄ ａｎｄ ＮＯ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ Ａｇｒｉｃ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ，２０１０，５８（６）： ３４７２—３４７８． ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ａｎｄ ＲＡＷ ２６４．７ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ［Ｊ］．Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃ Ｂｉｏｌ Ｍｅｄ，２０１６，９５：２３０—２４２． ［５］ Ｗｅｎｇ ＴＩ，Ｗｕ ＨＹ，Ｋｕｏ ＣＷ，ｅｔ ａ１．Ｈｏｎｏｋｉｏｌ ｒｅｓｃｕｅｓ ｓｅｐｓｉｓ—ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ａｃｕｔｅ ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ ａｎｄ ｌｅｔｈａｌｉｔｙ ｖｉａ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ［２１］ Ｇｒｅｅｎ ＤＲ，ＲｅｅｄＪＣ．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９８， ａｎｄ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ［Ｊ］Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ，２０１ ｌ，３７（３）：５３３．５４１． ［６］ ｕ Ｌ，Ｘｕ Ｒ，Ｗａｎｇ ＳＹ，ｅｔ ａ１．Ｈｏｎｏｋｉｏｌ ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎｔｈｒｏｕｇｈ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＰＴＸ３ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ａｋｅｙｍｅｄｉａｔｏｒ ２８１（５３８１）：１３０９—１３１２． ［２２］ Ｇｒｏｓｓ Ａ，ＭｃＤｏｎｎｅｌｌＪＭ，Ｋｏｒｓｍｅｙｅｒ ＳＪ．ＢＣＬ－２ ｆａｍｉｌｙ ｍｅｍｂｅｒｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ ｉｎ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ，１９９９，１３（１５）：１８９９— １９１１． ｏｆ ＩＫＫ／ＩｋａｐｐａＢ／ＮＦ—ｋａｐｐａＢ ｉｎ ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ ｃｅｌｌ ｍｏｄｅｌ［Ｊ］．Ｅｘｐ Ｍｏｌ Ｍｅｄ ２０１５，４７（７）：ｅｌ７１． ［２３］ Ｓｈｉ ＹＧ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｃａｓｐａｓｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ［７］ Ｐｉｌｌａｉ ＶＢ Ｊ Ｓａｍａｎｔ ＳＪ Ｓｕｎｄａｒｅｓａｎ ＮＲＪ ｅｔ ａ１．Ｈｏｎｏｋｉｏｌ ｂｌｏｃｋｓ ａｎｄ ｒｅｖｅｒｓｅｓ ｃａｒｄｉａｃ ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ ｉｎ ｍｉｃｅ ｂｙ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ，２００２，９（３）：４５９—４７０． Ｓｉｒｔ３［Ｊ］．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ，２０１５，６（６６５６）：１－１６． ［８］ Ｍａｔｕｔｅ—Ｂｅｌｌｏ Ｇ，Ｄｏｗｎｅｙ Ｇ，Ｍｏｏｒｅ ＢＢ，ｅｔ ａ１．Ａｎ ｏｆｉｃｉｆａｌ Ａｍｅｒｉｃａｎ （本文编辑傅希文） Ｔｈｏｒａｃｉｃ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｗｏｒｋｓｈｏｐ ｒｅｐｏｒｔ：ｆｅａｔｕｒｅｓ ａｎｄ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｃｕｔｅ Ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ ｉｎ ａｎｉｍａｌｓ［Ｊ］．ＡｍＪ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，２０１ １，４＿辱（５）：７２５．７３８． Ｄａｒｍｏｎ Ｍ，Ｃｌｅｃ’ｈ Ｃ，Ａｄｒｉｅ Ｃ ｅｔ ａ１．Ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｄｉｓｔｒｅｓｓ ［９］ 本文引用：陈兰，李雯，王导新．和厚朴酚通过激活线粒体依 ｓｙｎｄｒｏｍｅ ａｎｄ ｒｉｓｋ ｏｆＡＫＩ ａｍｏｎｇ ｃｒｉｔｉｃａｌｌｙ ｉｌｌ ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．ＣｌｉｎＪ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ，２０１４，９（８）：１３４７－１３５３． 赖的Ｓｉｒｔ３／ＡＭＰＫ途径减轻脂多糖所致的急性呼吸窘迫综合 征［Ｊ］．中南大学学报（医学版），２０１８，４３（１０）：１０７５．１０８２．ＤＯＩ：１０．１１８１７／ ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２—７３４７．２０１８．１０．００６ Ｃｉｔｅ ｔｈｉｓ ａｒｔｉｃｌｅ ：ＣＨＥＮ Ｌａｎ，ＬＩ Ｗｅｎ，ＷＡＮＧ Ｄａｏｘｉｎ．Ｈｏｎｏｋｉｏｌ ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ｌｉＰ０Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ—ｉｎｄｕｃｅｄ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｄｉｓｔｒｅｓｓ ［１ｏ］ Ｃａｌｆｅｅ ＣＳ，Ｊａｎｚ ＤＲ，Ｂｅｒｎａｒｄ ＧＲ Ｊ ｅｔ ａ１．Ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ ｏｆ ｄｉｒｅｃｔ ｖｓ ｉｎｄｉｒｅｃｔ ＡＲＤＳ ｉｎ ｓｉｎｇｌｅ－ｃｅｎｔｅｒ ａｎｄ ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ ｓｔｕｄｉｅｓ［Ｊ］．Ｃｈｅｓｔ，２０１５，１４７（６）：１５３９，１５４８． 【１１］ Ｍｉｌｌａｒ ＦＲ，Ｓｕｍｍｅｒｓ Ｃ，Ｇｒｉｆｆｉｔｈ ＭＪ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｄｉｓｔｒｅｓｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ：ｉｎｓｉｇｈｔｓ ａｎｄ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｖｉａ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉｏｎ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｓｉｒｔ３／ＡＭＰＫ ｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｅｎｔｒｌａ Ｓｏｕｔｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｙｔ．Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１８， ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ［Ｊ］．Ｔｈｏｒａｘ，２０１６，７ｌ（５）：４６２，４７３． ４３（１０）：ｉ０７５—１０８２ ＤＯＩ：１０．１１８１７／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２．７３４７．２０１８．１０．００６
