酶的特异性及影响酶活力因素的检测技术实验报告
一、 实验目的
1、了解pH对酶的活性的影响机理;
2、掌握如何选择酶催化反应的最适pH和获得最适pH条件的确定。
二、 实验原理
酶的生物学特征之一是它对酸碱的敏感性，这表现在酶的活性和稳定性易受环境pH的影响。pH对酶的活性的影响极为显著，通常各种酶只在一定的pH范围内才表现出活性，同一种酶在不同的pH值下所表现的活性不同，其表现活性最高时的pH值称为酶的最适pH。各种酶在特定条件下都有它各自的最适pH。在进行酶学研究时一般都要制作一条pH与酶活性的关系曲线，即保持其他条件恒定，在不同pH条件下测定酶促反应速度，以pH值为横坐标，反应速度为纵坐标作图。由此曲线，不仅可以了解反应速度随pH值变化的情况，而且可以求得酶的最适pH。
三、 实验器材与试剂
1.试剂:磷酸氢二钠、乙酸钠、磷酸二氢钠、柠檬酸和乙酸。
2、器材：可见分光光度计、恒温水浴锅、试管、酸度计
四、 操作步骤
1. 配置缓冲溶液
2. 反应液的配方
准备二组各6支试管，第一组6支试管中，在每支都加入4.5ml上表中相应的缓冲液，然后加入一定量浓度的6.5%蔗糖酶溶液1.0ml(此时的蔗糖酶只能用H2O稀释，酶的稀释倍数和加入量要选择适当，以便在当时的实验条件下能得到0.6-1.0的光吸收值A520。另一组6支试管也是每支都加入4.5ml上表中相应的缓冲液，但不再加酶而加入等量的去离子水，分别作为测定时的空白对照管。所有的试管都用水补足到5.0ml。
3. 终止反应
所有的试管按一定时间间隔加入0.5ml蔗糖(6.5%)开始反应，反应5min后分别加入5.0ml0.1mol/LNaOH溶液，在按测定酶活力的程序操作，测出A520 。
五、 结果与分析
以反应速度(葡萄糖量.min-1)为纵坐标，以pH为横坐标，绘制下蔗糖酶活性与pH的关系曲线。分析曲线并确定蔗糖酶的最适pH或pH范围。
