毒死蜱对斑马鱼的急性毒性试验

天津300384；天津300384）（1.天津农学院水产学院，天津市水产生态及养殖重点试验室，创新创业试验室，2.天津农学院，

以24~96h半致死浓度（LC50）摘要：为了研究毒死蜱对于斑马鱼的毒性和安全评价进行急性毒性试验，来判定斑马鱼对毒死蜱的敏感性。结果表明，毒死蜱24hLC50、48hLC50、72hLC50、96hLC50分别为1.345mg/L、1.080mg/L、0.992mg/L、0.926可以判定毒死蜱对斑马鱼为高毒。《化学农药环境安全评价试验准则》中农药对鱼类的毒性等级划分，

关键词：斑马鱼；急性毒性；毒死蜱；半致死浓度；安全质量浓度中图分类号：S482

文献标志码：A

文章编号：1004-2091(2018)10-0034-03

（SC）判定毒死蜱对斑马鱼急性毒性为玉级，安全质量浓度为0.209mg/L。参照我国化学物质对鱼类毒性分级标准，根据mg/L，

（Daniorerio）花条鱼、斑斑马鱼又名蓝条鱼、

马担尼鱼等，是一种热带观赏鱼体长4~6cm，胚

生长发育快胎透明且体外发育，易于活体观察，

[1]

了数据参考。

1

遗传和毒理。因此已经成为生命科学中对疾病，

学的理想模式生物[2]。随着人类社会的迅速发展，如重金属，工业污水，工业上产生的各种废弃物，

农业上产生的农药、消毒液残留等有害物质通过

雨水冲刷，或者直接向农田施肥等途径对土壤、并且直接威胁到人类鱼类等产生了严重的影响，

健康。目前，国内关于鱼类急性毒性的试验研究，

斑马鱼还未被广经常以鲤、金鱼作为试验对象，斑马泛地应用于药物毒理学的研究[1-2]。近几年，

而毒死蜱鱼可作为监测药物靶器官的有效模型，对于水生生物的急性毒性研究相对较少[3-6]。我国目前农药年产量已达到80万t，居于世界第2位[7-9]。

毒死蜱是一种广谱高效的有机磷杀虫、杀螨剂，对鱼类和水生生物具有触杀、胃毒和熏蒸作用，毒性较高毒[10-11]。该试验采用农药毒死蜱对斑马鱼进行急性毒性试验，获得了毒死蜱对斑马鱼的基础毒理学数据，为水产养殖和鱼病防治等提供

1.1

材料与方法

平均体长3.9cm，斑马鱼购于天津市某花鸟市场，供试材料

平均体质量0.44g。毒死蜱（有效成分含量40%，规

格300g，乳油剂型），购自湖北仙隆化工股份有限公司。1.2

采用静水法进参照吕爱军等[12]试验方法进行，试验方法

行急性毒性试验。斑马鱼试验前在室内驯养5d以

上，其自然病死率小于1%，试验前1d停止投喂饲

培养箱温度为（25依2）光料，在试验期间不喂食。益，照/黑暗为12h/12h。以毒死蜱配制7个不同浓度

并设1个空白对照，系列，每个浓度及对照组随机放入10尾斑马鱼。试验开始后连续观察8h，并观

反应、平衡、游动、察和记录鱼的中毒情况（呼吸、体色变化）及96h内的死亡情况和开始死亡时间及时捞出，以免污与死亡数目。当出现鱼死亡时，

染水质，观察记录鱼体表特征与内脏表面特征。试验时间是96h，96h后如果仍有活鱼，则继续试验

资助项目：国家大学生创新训练计划项目（201810061036）；天津农学院大学生创新训练计划项目（201810061174）；天津市（ITTFRS2017009）自然科学基金项目（16JCZDJC33500，；天津市水产产业技术体系创新团队；天津农学院十18JCYBJC299000）（J01009030638）“创新团队培养计划”（TD13-50）三五综投平台项目；天津市高等学校现代水产生态健康养殖

霍奕安（1998—）本科.E-mail：作者简介：，男，572770975@qq.com

胡秀彩（1976—）通信作者：，女，实验师，主要从事水产微生物学研究.E-mail：huxiucai@126.com

第10期霍奕安，等毒死蜱对斑马鱼的急性毒性试验

35至7d。

1.3数据处理

20%，到48h已经死亡70%，24~48h是斑马鱼的集中死亡时段；毒死蜱质量浓度达到1.4mg/L时，72h内斑马鱼病死率达到100%；毒死蜱质量浓度为1.5mg/L时，7h内试验鱼身体出现明显折弯现象，鳃部均有不同程度的出血，至12h死亡6条，至

试验数据分析采用的是Bliss法来计算斑马鱼

的半致死浓度LC50，安全质量浓度用公式为

2

2.1

结果

2

（24hLC50/48hLC50）。SC=48hLC50伊0.3/

病死率=死亡试验鱼数/试验鱼总数伊100豫。

斑马鱼急性毒性试验结果

毒死蜱质量浓度低于1.0mg/L时，48h全部死亡。1

周后仍有试验鱼存活。各组的试验鱼7d时的病死率相比于96h，在质量浓度为0.9mg/L和质量浓度为1.0mg/L时出现变化，分别病死率从50%上升至

毒死蜱对斑马鱼急性毒性试验发现，毒死蜱

质量浓度为1.3mg/L时，5h后有1条开始出现失

衡，偶尔急速窜游现象，死12h内试验鱼出现死亡，亡1条，鳃部有明显出血现象，至24h病死率为

80%、60%上升至90%。当毒死蜱质量浓度为0.6

说明此时毒死蜱对斑未出现试验鱼死亡，mg/L时，

（表1）马鱼的毒性作用比较小。

豫

1.4506010010010080

1.56090100100100100（病死率）表1毒死蜱对斑马鱼急性毒性作用

时间/h2446

7d后7212毒死蜱质量浓度（/mg/L）

0.60000000.930405080001.0104050609001.220601001007001.310207010010090

2.2

斑马鱼中毒表现及死亡特征

反应比较强烈。在毒死蜱对斑马鱼中毒较快，

经过统计学分析，计算毒死蜱半致死浓度和

质量安全浓度值见表2。试验结果表明，毒死蜱的安全质量浓度为0.209mg/L。参照GB/T21281—2007我国化学物质对鱼类毒性分级标准

一般都低浓度梯度试验中，斑马鱼刚开始放入时，

消出现较为激烈的急速蹿游现象，但随后会消失，鱼群失的时间长短与浓度有关。适应试验环境后，顶积极游动，偶尔会有集群现象，既而出现上浮、水、尾略下垂等现象。但是随着中毒程度的愈来愈

时而垂直于水面等深，试验鱼出现抽筋，时而翻肚、并且呼吸加快加重或弓失衡现象，或者沉于水底，

渐渐地游动能力减弱背，身体出现明显折弯现象，几乎都会出现腮部甚至丧失、反应迟钝、沉于水底，

出血直至死亡。

在高浓度梯度试验中，斑马鱼在开始受药的短

严重失衡挣扎短2~5h中，出现强烈的急速窜游，现象，甚至跃出水面。试验鱼短时间内鳃部出现明

直至死亡，身体有很明显显出血，继而在水中打转，的折弯现象。高质量浓度组相比于低质量浓度组从

中毒现象斑马鱼受试中毒到死亡的间隔时间变短，也更加明显。2.3

（SC）LC50值及质量安全浓度

（96hLC50臆1.0mg/L时为急性毒性玉级，1.0mg/

L臆96hLC50臆10.0mg/L为急性毒性域级，10.0

mg/L臆96hLC50臆100.0mg/L为急性毒性芋级）[13]

。毒死蜱的96hLC50为0.926mg/L，由此判定毒死蜱对斑马鱼的急性毒性为玉级。根据《化学农药

[14]环境安全评价试验准则》中农药对鱼类的毒性等级划分（剧毒，高毒，96hLC50臆0.1mg/L；96h

LC50臆1.0mg/L；中毒，1.0mg/L约96hLC50臆10.0

表2斑马鱼的LC50和SC

时间/h48729624毒死蜱

（/mg/L）1.0800.9920.9261.345LC50

95豫可信限0.95687~1.18140.80169~0.992290.87756~1.07631.2611~1.4625（/mg/L）安全质量浓度（/mg/L）0.209

36水产养殖猿怨卷

mg/L对斑；低毒，96hLC50跃10.0mg/L），可判定敌敌畏3

讨论

马鱼为高毒。

近几年，斑马鱼可作为监测药物靶器官的有效

动物模型，而毒死蜱对于水生生物的急性毒性研究相对较少[3-6]。赵于丁等[15]报道10种农药对斑马鱼的毒性与安全评价中，涉及到毒死蜱对于斑马48鱼的毒性研究，结果显示毒死蜱对于斑马鱼的24、

0.34、72和96h的半致死浓度分别为0.7943中毒症和状为0.5184先兴奋mg/L，后，并且游动迟斑缓马或鱼困对难于，毒、0.7332得死出蜱的的、

结果判定毒死蜱对斑马鱼为高毒。在该试验中，毒死蜱对斑马鱼的安全质马、量浓度鱼品系、季节和气温等有浓为48、72和96h的半致死关度较0.209。斑高马，mg/L鱼这对可，斑于能马毒与鱼24死斑蜱的中毒症状相对一致，而且判定毒死蜱对斑马鱼均为高毒，可以为水产养殖和鱼病防治提供相对有价值的参考数据。

马军国等[16]

通过毒死蜱对于尖膀胱螺的急性毒性试验发现，毒死蜱对尖膀胱螺24、48、72和96h时0.243的半致死浓度分别0.016马鱼。马mg/Lmg/L和0.160mg/L是0.577以及安mg/L全、质0.308量浓mg/L度为、继，华显示等[17]毒报道死蜱毒对死于蜱螺对类的于南毒美性白要对大于虾的斑急性96毒性影响，结果表明对南美1.36h滋滋的半致死浓度分别为3.44白对滋虾24、48、72和道g/L南，

美可g/L和0.滋g/L以及安全质量g/L浓、度2.08为0.00

滋g/L、白见对毒死虾蜱表对现出于虾来类的的中毒毒性症更状加有高狂。游已和有报冲

撞，在水中打转；或者上下直窜，急速游动。持续一段时间之后，体色开始变白变淡，

逐渐丧失游泳功能，失去平衡，躺卧在水底。南美白对虾在高浓度梯度试验组中的中毒反应很迅速，在短时间内全部个体都出现明显的中毒症状；而在低浓度试验组中，则要经过很长时间之后才有个别受试虾出现异常的症状。这与毒死蜱对于斑马鱼的中毒现

象非常相似，尤其体现在鱼体色变淡，出现急速窜游和失衡等现象。

该研究结果表明，毒死蜱对斑马鱼的急性毒性

为玉级，对斑马鱼的毒性等级为高毒。毒死蜱的安全质量浓度为0.209mg/L，因而毒死蜱对于斑马鱼

的毒性较为强烈，不是斑马鱼的安全药物，

不建议用来作为杀灭寄生虫渔药，在水产养殖中需要谨慎使用。

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美白对虾的急（收稿日期：2018-03-19）

渊下转第41页冤

（第10期石伟，等沙湖水生生物生物量及鱼产力评估41

Assessmentofaquaticlife

biomassandfishproductivityinshahulake

(1.AquacultureTechnologyPromotionServiceCenter,Yinchuan750001,China;2.Municipalanimalhusbandryandaquatictechnologypromotionservicecenter,Shizuishan753000,China)

Abstract:Aquaticlifedensityandbiomasswereinvestigatedandanalyzedtoexplorethepopulationstruc原

ShiWei1,WangXiaoyi1,YuJinshan2

tureoftheaquaticorganismandfishproductivityinXinghailakefromApril2016toJanuary,2017.Theresultsshowedthattheaverageannualbiomassofphytoplanktoninthelakewas8.799mg/L,andthefishproductionproductionpotentialwasestimatedtobe77.51kg/hm2.Theproductionpotentialofexogenousfoodcanprovidepotentialwasestimatedtobe106.47kg/hm2.Theannualbiomassofzooplanktonwas3.523mg/L,andthefish

111.36kg/hm2forsilvercarpandbighead.Thehighesttheoreticalproductionofsilvercarpandbigheadwas334.69kg/hm2yearly.Themaximumvalueoftheoreticalproductionofsilvercarpandbigheadcarpwas601.36tperyearwhenaquacultureareawas1800hm2.TheproductivityofomnivorousfishprovidedbybenthicandAquaticplantscouldprovideafishyieldof851.2g/hm2.Thereasonablestockingrateofsilvercarp,bighead

Keywords:Aquaticlife;density;biomass;fishproductivity

crustaceanwas22.45kg/hm2,whichcouldproduceomnivorousfish(conmencarp,cruciancarp,etc.)90.92t.carp,omnivorousfishandherbivorousfishwas266kg/hm2,217.5kg/hm2,50.4kg/hm2,50.4kg/hm2,respective原ly。

渊上接第36页冤

Theacutetoxicitytestofchlorpyrifostozebrafish

HuoYian1,2,HuXiucai1,2,LvAijun1,SunJingfeng1

（1.TianjinKeyLabofAqua-EcologyandAquaculture,CollegeofFisheries,TianjinAgriculturalUniversity,Tianjin300384,China；2.LabofInnovationandentrepreneurship,TianjinAgriculturalUniversity,Tianjin300384,China）

Abstract:Tostudythetoxicityandsafetyevaluationofchlorpyrifospesticidesforzebrafish，themethodof

acutetoxicitytestin24-96hhalflethalconcentration(LC50)wasusedtodeterminethesensitivityofzebrafishto

1.3454mg/L,1.080mg/L,0.992mg/Land0.926mg/L,respectively;andsafemassconcentration(SC)was0.209forzebrafishwasdetermineasgrade玉.Accordingtothechemicalpesticideenvironmentalsafetyevaluationtestguidelinespesticidetoxicitytofishinthehierarchy,chlorpyrifoscanbedeterminedashightoxicforzebrafish.

Keywords:zebrafish;chlorpyrifos;acutetoxicity;LC50;SC

chlorpyrifos.Experimentalresultsshowedthat24hLC50,48hLC50,72hLC50and96hLC50ofchlorpyrifoswas

mg/L.Withreferencetoourcountrychemicalclassificationstandardtoxicitytofish,acutetoxicityofchlorpyrifos