中国现代医生2018年6月第56卷第17期窑检验医学窑质谱流式细胞技术诊断结肠癌患者抗原CD45的临床价值孙倩杨丽君万晓晨银310013浙江医院检验科袁浙江杭州[摘要]目的探讨应用离心力对质谱流式细胞技术对结肠癌患者抗原CD45的诊断价值及对其预后质量的影响遥方法选取2011年1月~2012年1月我院收治的结肠癌患者120例袁收集结肠癌患者的结肠细胞袁将收集的结肠癌细胞进行离心袁分为400g离心组为研究组和140g离心组为对照组渊每组细胞数量相同袁且均为1伊105个冤遥采用质谱流式细胞技术对两组死亡细胞百分比尧抗原CD45表达情况及活细胞中高表达CD45的细胞数量进行检测遥结果经过研究分析袁研究组抗原CD45表达阳性率尧抗原阳性率低于对照组袁死亡细胞百分比显著高于对照组渊P约0.05冤曰离心前两组患者K562杀伤比率尧NK细胞尧B淋巴细胞尧T淋巴细胞对比差异无统计学意义渊P跃0.05冤袁离心后研究组K562杀伤比率尧NK细胞尧B淋巴细胞尧T淋巴细胞显著低于对照组渊P约0.05冤遥结论对结肠癌患者在运用质谱流式细胞技术对其抗原CD45的诊断同时应用离心力技术袁一方面能够提高诊断价值袁另一方面能够改善患者的预后质量袁值得在临床上进行推广与使用遥[关键词]结肠癌曰离心力曰质谱流式细胞技术曰抗原CD45曰诊断价值曰预后质量[中图分类号]R735.35[文献标识码]B[文章编号]1673-9701渊2018冤17-0125-03TheclinicalvalueofmasscytometryindiagnosisforCD45expressioninpatientswithcoloncancerSUNQianYANGLijunWANXiaochenDepartmentofLaboratory,ZhejiangHospital,Hangzhou310013,China[Abstract]ObjectiveToexploretheeffectofcentrifugalforcesonclinicalvalueandpatients爷lifequalityofmasscy鄄tometryindiagnosisforCD45expressionincoloncancercells.Methods120patientswithcoloncancerwhoweretreat鄄edinourhospitalfromJanuary2011toJanuary2012wereselected.Theircoloncellswerecollectedandrandomlydi鄄videdintotwogroupsbycentrifugalforcesasfollows:400gcentrifugalforcesgroupasstudygroupand140gcentrifu鄄galforcesgroupascontrolgroup(1伊105cellsineachgroup).Wedetectedthepercentageofdeadcells,theexpressionofCD45andthenumberoflivecellswithhighexpressionofCD45bymasscytometry.ResultsAfteranalysis,thepos鄄itiverateofantigenCD45expression,thepositiverateofantigenofthestudygroupwerelowerthanthoseofthecon鄄trolgroup,thepercentageofdeadcellsofthestudygroupweresignificantlyhigherthanthoseofthecontrolgroup(P<0.05).TherewasnosignificantdifferenceinK562killingratio,NKcell,BlymphocyteandTlymphocyteintwogroupsbeforecentrifugal(P>0.05).Aftercentrifugation,K562killingratio,NKcell,BlymphocyteandTlymphocyteoftheprognosisofpatients,deservingclinicalapplicationandpopularization.studygroupweresignificantlylowerthanthoseofcontrolgroup(P<0.05).ConclusionTheuseofmasscytometryindi鄄agnosisforCD45expressioninpatientswithcoloncancercanimprovethevalueofpertinenceaswellasthequalityof[Keywords]Coloncancer;Centrifugalforces;Masscytometry;AntigenCD45;Diagnosticvalue;Qualityofprognosis医学中所指的恶性肿瘤常被人们称之为癌症袁临床实践中袁结肠癌的发病率和致死率较高袁是最为常见的也是对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一遥结肠癌可以进一步分为小细胞型和非小细胞型袁最近几年袁我国结肠癌患者数量极速增加袁据权威机构统计袁年平均增长速度高达27.6%[1]遥结肠癌有着比较明显的特点袁如患病人群一般在42周岁以上曰男性患者远远高于女性患者袁比例大约为4.5:1曰发病初期症状不易被觉察袁大部分患者被确诊时已接近晚期曰[基金项目]浙江省医药卫生科技计划渊2014KYA003冤银通讯作者不宜采取外科手术方法治疗袁多采用介入手段袁如放化疗等[2]遥临床实践中袁化疗方法能够有效延缓患者生存时间袁提升患者生存质量袁是较有效的治疗手段遥近几年袁随着分子生物学的发展袁流式细胞技术已经广泛应用于癌症的研究与治疗领域遥流式细胞包括质谱流式细胞技术袁其原理是采用同位素标记法进行标记抗体袁使得细胞能够多参数进行检测袁有关研究发现袁最多可以检测数目可达50种左右[3]遥虽然这几年这种技术的使用越来越多袁但是在实体肿瘤方面的应用尚未成熟袁仍是研究阶段遥而本文研究的CD45是一种酶受体袁具体酶包括酪氨酸磷酸酶袁这些酶是诊断结CHINAMODERNDOCTORVol.56No.17June2018125窑检验医学窑肠癌必备的指标之一[4]年1月~2012年1月收治的结肠癌患者遥针对这种问题袁我院选取120例袁2011收集结肠癌患者的结肠细胞袁将收集的结肠癌细胞进行离心袁分为400g离心组和140g离心组袁采用质谱流式细胞技术对两组死亡细胞百分比尧抗原CD45表达情况及活细胞中高表达CD45的细胞数量进行检测袁分析结肠癌患者应用离心力对质谱流式细胞技术对其抗原CD45的诊断价值及对其预后质量的影响遥现报道如下遥1资料与方法1.1一般资料选取2011年1月~2012年1月我院收治的非小细胞肺癌120例袁进行实验离心后袁分为400g离心组为研究组和140g离心组为对照组遥上述患者均已通过病理切片和影像检查手段予以确诊遥纳入标准[5]经过西医和传统的中医诊断予以确诊曰年龄逸25岁院曰对化疗无相关禁忌曰KPS评分跃70分曰预计生存期跃3个月曰多发性病灶至少一个可测量曰无法采取手术治疗曰病情属于中晚期[3]参与本次研究院渊1冤遥心脏等脏器严重受损或者患有出排除标准[6]院下列类型的患者不能血性相关病症的患者曰渊2冤正处于哺乳或妊娠期的女性患者曰渊3冤已经过手术和放疗手段治疗且结束时间未超过三个月的患者曰渊4冤治疗过程中出现感染袁尚未得到控制的患者曰渊5冤药物性过敏体质的患者遥渊47.5依1.2冤对照组男平均岁曰研究组男47例袁女5113例例袁女袁年龄9例袁29耀73年龄31耀76岁袁平均岁袁渊渊49.6依2.4冤岁遥两组患者的一般资料有可比性批准P跃0.05冤袁遥均知情同意本研究袁并经过医院伦理委员会1.2方法仪器院细胞培养箱尧搅拌器尧质谱流式细胞仪等遥首先是细胞培养及分组处理遥选取2011年1月~2012年1月我院收治的结肠癌患者120例袁收集结肠癌患者的结肠细胞袁将结肠癌细胞在培养基中进行培养遥培养的条件为院培养箱要经过严格消毒且对培养箱要进行恒温恒压设定袁进出细胞间的实验人员要进行消毒且培养箱中要放置4%多聚甲醛固定液袁具体配置如6.16下多聚甲醛g尧NaH院PBS院0.1M8PO的PBS尧Nacl1.7g尧Na2HPO4窑12H22g尧4用窑2H102OOmL0.560.1Ng尧双蒸水定容至NaOH调解至pH2007.4mL尧左右渊建议用1N的NaOH调pH冤袁磁力搅拌器上加热渊不超过NaOH60益冤搅拌袁溶解需大约4~5h袁0.1NNaOH配制院NaOH0.02g尧双蒸水定容至5mL袁1NNaOH配制院于对数生长期的结肠癌细胞0.2g尧双蒸水定容至5袁mL遥采取消化酶之后选择生长期处渊胰酶冤袁进行消化后分为两组院400g离心力组与140g离心力126CHINAMODERNDOCTORVol.56No.17June2018中国现代医生2018年6月第56卷第17期组进行离心遥对于400g离心力组院首先对消化后的细胞进行PBS洗涤袁之后细胞采用400g离心力袁进行离心1405min袁重复离心3次后之后细胞采用g离心力组袁舍去上清袁取沉淀遥对于140院首先对消化后的细胞进行g离心力袁进行离心5min袁PBS重复离洗涤袁心3次后袁舍去上清袁取沉淀遥两组沉淀细胞在流式细胞仪中进行检查遥将两组细胞分别放入试管中袁分别加入甲醇进行固定袁固定半小时后进行染色袁往试管中加入染色缓冲液袁先混匀再静止放置半小时待充分染色均匀后进行离心遥离心后取沉淀袁往沉淀中加入况进行分析PBS缓冲液后遥袁启动质谱流式细胞仪袁对细胞表达情1.31.3.1疗效判断标准组细胞进行离心后不同离心力组死亡细胞对比袁采用质谱流式细胞仪对研究组与对照袁对活细胞以及死亡细胞进行分析袁并统计死亡细胞百分比遥使用仪器软件1.3.2GraphPadPrism统计软件遥主要是质谱流式细胞仪不同离心力组抗原袁检查两组细胞的抗原CD45表达情况检查仪器CD45表达情况进行对比遥若患者抗原CD45表达则为阳性袁阳性率为抗原1.3.3析法渊CMIA冤不同离心力组患者免疫学指标对比CD45表达的细胞比总细胞比值采用美国雅培ARCHI-TECTi2000化学免疫分遥及其配套试剂产品袁根据产品说明书进行操作袁步骤主要包括加样尧孵育尧洗板尧加酶尧比色等遥设计好标本位置尧检测项目袁按开始键即可遥患者进行抽血检验袁酶联免疫吸附试验判断细胞内K562含量以及NK细胞尧B淋巴细胞B/T尧T淋巴细胞的数量袁以确定患者各类细胞如1.4统计学方法淋巴细胞的被杀伤比率[7]遥渊%冤表示数据应用袁采用SPSS18.0字进行分析袁其中计数资料以2检验袁计量资料以渊x依s冤表示袁采用t检测袁P约0.05为差异有统计学意义遥2结果2.1两组抗原CD45表达情况比较经分析袁研究组抗原CD45表达阳性率尧抗原阳性率皆低于对照组袁而死亡细胞百分比情况显著高于对照组渊P约0.05冤袁见表1遥表1两组抗原CD45表达情况比较组别n阳性率抗原阳性率死亡细胞百分比研究组10渊16.7冤[n渊%冤]18渊30.0冤47.5依1.4渊%冤78.2渊13480/17238冤[%渊n/n冤]对照组60字2/60Pt约0.054.83550.0依2.361.2渊2370/3870冤跃0.051.456约0.055.394中国现代医生2018年6月第56卷第17期2.2两组离心前后免疫学指标比较离心前两组患者K562杀伤比率尧NK细胞尧B淋巴细胞尧T淋巴细胞对比无明显区别渊P跃0.05冤袁离心后研究组K562杀伤比率尧NK细胞尧B淋巴细胞尧T淋巴细胞显著低于对照组渊P约0.05冤袁见表2遥表2两组离心前后免疫学指标比较渊x依s袁分冤组别n时间K562比率渊%冤杀伤NK胞淋巴细渊个冤T胞淋巴细渊个冤对照组60离心前渊个细胞离心后72.3依8.316.7依8.1冤B19.9依5.5研究组60离心前74.5依13.172.1依8.017.1依10.317.3依5.420.3依3.958.5依14.3离心后ab56.7依13.412.3依8.518.6依5.5注院与离心前比较袁aP约0.05曰与对照组比较袁bP约0.0517.9依4.159.6依12.560.2依9.230.7依8.73讨论随着我国经济的发展袁科技水平也在不断发展遥一些科学技术也在不断应用于医疗技术之中遥近年来袁随着分子生物学迅猛发展袁对于人体细胞水平的研究在不断进行之中[8]生大大帮助了人们对细胞的研究遥而质谱流式细胞仪技术的诞遥质谱流式细胞技术是将质谱检测技术与传统流式细胞技术相结合袁对细胞进行跟踪分析遥临床实践中袁化疗方法能够有效延缓患者生存时间袁提升患者生存质量袁是较有效的治疗手段[9]技术已经广泛应用于癌症的研究与治疗领域遥近几年袁随着分子生物学的发展袁流式细胞遥流式细胞包括质谱流式细胞技术袁其原理是采用同位素标记法进行标记抗体袁使得细胞能够多参数进行检测袁有关研究发现袁最多可以检测数目可达50种左右遥虽然这几年这种技术的使用越来越多袁但是在实体肿瘤方面的应用尚未成熟袁仍是研究阶段[10]本文研究中袁在进行质谱流式细胞检测前遥袁对细胞进行进一步的加工也就是细胞的离心纯化[11]选择不同的离心力袁将细胞进行分类袁在本文选择的遥通过离心力分为两组一种为140g尧一种是400g遥且进行离心时注意离心力的选择袁要适当袁不能选择过大或者过小遥因为过大时袁部分细胞会破裂尧震碎[12]力过小时袁一些杂质分离不出袁使得检测结果有误差遥离心遥我院所采取的对照试验表明CD45袁400g离心力组抗原本文研究的表达情况显著高于CD45是一种抗原140g离心组袁在临床上它的别渊P约0.05冤遥称为白细胞共同抗原袁这种抗原在白细胞中均进行表达袁并且临床研究显示袁CD45的表达含量与淋巴细胞的活化程度密切相关[13]其表达量越低遥而在临床实践中袁且随着结肠癌病发程度越大袁一般对恶性肿瘤特袁别是晚期恶性肿瘤治疗采用传统化疗方案副作用大尧效果差袁因此袁临床上从细胞角度进行分析袁找出更加简单的治疗方法袁缓解患者痛苦袁延缓患者生命[14]床用于治疗癌症袁原理一般为院渊1冤能够有效控制肿瘤遥临窑检验医学窑的产生和增长袁将肿瘤发展控制在初期袁进而致使癌细胞死亡[15]肿瘤发展具有明显的阻碍作用曰渊2冤能够有效控制癌细胞转移袁迟滞肿瘤生成袁对于恶性袁以此实现阻碍肿瘤生成和扩散的的目的[16]免疫功能,可以提高细胞活力袁破坏恶性肿瘤细胞的曰渊3冤提高人体生成袁全面提升患者免疫能力[17]用袁使蛋白含量和基因功能方面加强人体有效因子的曰渊4冤减轻化疗副作产生袁增强细胞功能袁提升患者白细胞数量曰渊5冤明显改善患者消化道功能袁增强胃壁厚度袁以此降低患者不良反应[18-20]对比无明显区别遥本文研究发现渊P跃0.05冤袁离心后研究组免疫学指标袁离心前患者免疫学指标显著优于对照组渊P约0.05冤遥综上所述袁对结肠癌患者在运用质谱流式细胞技术对其抗原CD45的诊断同时应用离心力技术袁一方面能够提高诊断价值袁另一方面能够改善患者的预后质量袁值得在临床上进行推广与使用遥[参考文献][1]姜霞检测结肠癌细胞表面抗原袁翟从劼袁张峰袁等.离心力对质谱流式细胞技术CD45表达结果的影响[J].[2]山东医药冯文磊鉴定小鼠骨髓间充质干细胞和内皮前体细胞袁张猛袁2017袁57渊24冤院13-15.袁印双红袁等.改良差时贴壁法分离培养[J].解剖[3]学报李艳荣袁2015袁46渊2冤院282-288.CD4+CD45袁郭莲怡+分子表达的变化及临床意义.溃疡性结肠炎患者外周血[J].医学T细胞表面[4]院学报周琰袁2015袁36渊2冤院127-129.胞术要要要袁李琴流式细胞技术的袁刘皋林袁等.临床野后荧光时代渊前冤研究的质谱流式细冶[J].中国新药[5]与临床杂志王宁方个核细胞的特性及其临床意义袁赵崇山袁2017袁34渊1冤院1-6.袁李娟袁等.乳腺癌患者[J].肿瘤CD45-微泡和单[6]674-682.袁2016袁36渊6冤院陈建安细胞术免疫分型与袁周静袁朱学海FAB袁等分型的结果分析.118例急性白血病五色流式[7]2015袁13渊1冤院56-59.[J].海南医学袁张子杰临床意义及与血清.结肠癌组织VEGFVEGF浓度及其活化水平的相关表达与树突状细胞浸润的[8]性Wu[J].中国免疫学杂志袁2015袁14渊9冤院1257-1261.ValueXL袁TuSquamousofCirculatingQ袁FaureG袁etal.DiagnosticandPrognostic[9]analysis[J].CellScientificCarcinoma院ATumorReports袁2016袁26渊23冤院202-210.systematicCellsinreviewHeadandandmeta-Neck吕学文胞淋巴瘤患者外周血袁王博袁李扬秋.CHOPCD45RA+T方案治疗前后外周和CD45RO+TT细的变化特点[J].中国免疫学杂志袁2015袁24渊4冤院531-533.渊下转第131页冤CHINAMODERNDOCTORVol.56No.17June2018127中国现代医生2018年6月第56卷第17期窑检验医学窑[14]宋业颖袁许春伟袁吴永芳袁等.非小细胞肺癌患者肿瘤组测分析[J].医药杂志袁2015袁36渊4冤院1658-16.织中EGFR尧K-Ras和BRAF基因突变的分子病理检[5][6][7][8][9]王倩袁顾页袁林洁.高分辨率熔解曲线分析法检测结直生学报袁2015袁4渊8冤院840-842.肠癌组织K-ras基因突变及其临床意义[J].医学研究王杰袁衣素琴袁王欢袁等.非小细胞肺癌中c-Met尧EGFR尧K-Ras和EML4-ALK基因的检测分析[J].临床肿瘤学杂志袁2015袁12渊10冤院902-908.曾照志袁郭威袁刘明标.CT诊断结肠癌的临床价值探讨[J].中国现代医生袁2017袁55渊20冤院112-114.潘丹丽.超声造影用于结肠癌术前分期的临床价值分析[J].中国现代医生袁2017袁55渊14冤院103-105.吕矫洁袁孔蕴毅袁蔡旭袁等.BRAFV600E抗体在检测恶中华病理学杂志袁2017袁46渊8冤院548-552.[15]王建华袁李纪鹏袁金明威袁等.Sanger测序法和突变扩增97-101.阻滞系统法检测非小细胞肺癌EGFR基因19尧21号外显子突变的临床价值比较[J].浙江医学袁2017袁39渊2冤院[16]张凯袁顾滕振.结直肠癌组织K-ras尧BRAF及PIK3CA基因突变的检测及其与临床病理特征的关系[J].广西医科大学学报袁2016袁33渊2冤院299-301.[17]崔飞博袁陈南征袁郑见宝袁等.结直肠癌组织中EGFR尧BRAF和K-RasK-Ras基因的表达及其临床意义[J].中国普外基础与临床杂志袁2016袁9渊5冤院556-560.[18]IshidaT袁IshiiY袁TsurutaM袁etal.CetuximabpromotesSN38sensitivityviasuppressionofheatshockprotein27incolorectalcancercellswithwild-typeRAS[J].Oncolo鄄gyReports袁2017袁38渊2冤院90-91.2017袁32渊7冤院1105-1109.性黑色素瘤BRAFV600E基因突变中的应用价值[J].[10]鞠红艳袁白洋袁袁等.转化生长因子茁激活酶1在结24渊10冤院1417-1421.肠癌中的表达及临床意义[J].中国普通外科杂志袁2015袁[11]王珏袁张婷婷袁李娟袁等.不同原发肿瘤位置对于西妥昔渊6冤院1153-1155.单抗联合化疗治疗K-ras基因野生型的转移性结直肠癌患者的预后比较[J].现代生物医学进展袁2016袁16[19]宋红林.血清糖链抗原尧粘附分子及K-ras基因突变水平在胰腺癌中的表达及其临床意义[J].实用癌症杂志袁[12]蓝晓红袁周永刚.西妥昔单抗致横纹肌溶解及严重超敏[13]BencsikovaB袁BortlicekZ袁HalamkovaJ袁etal.Efficacyofbevacizumabandchemotherapyinthefirst-linetreat鄄渊1冤院37-39.mentofmetastaticcolorectalcancer院BroadeningKRAS-focusedclinicalview[J].BmcGastroenterology袁2015袁15反应1例[J].中国药师袁2015袁8渊2冤院285-286.[20]秦海霞袁崔红凯袁潘莹袁等.miR-143通过靶向K-ras基因的表达抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖[J].中华肿瘤杂志袁2016袁38渊12冤院3-7.[21]练英妮袁毛进星袁曾志坚袁等.XELOX和OLF化疗方案现代医学杂志袁2016袁21渊2冤院51-54.治疗基因突变型老年晚期大肠癌的疗效分析[J].中国渊收稿日期院2018-02-02冤渊上接第127页冤[10]汪宏梅袁张云宁袁罗云.流式细胞学技术检测急性髓细胞白血病患者外周血淋巴细胞亚群的效果分析[J].实用临床医药杂志袁2017袁21渊21冤院36-38.[11]王继英袁刘燕袁宋振袁等.急性B淋巴细胞白血病患者初发和化疗后微量残留白血病细胞免疫表型的比较[J].检验医学袁2016袁31渊6冤院467-473.[12]张菊英袁张亚衡.免疫磁珠阳性筛选联合流式细胞术对胰腺癌外周血循环肿瘤细胞的诊断价值[J].中国实验诊断学袁2016袁20渊4冤院551-554.[13]杨志瑞袁朱海燕袁达万明袁等.急性移植物抗宿主病患者外周血中T细胞功能亚群的变化及临床意义[J].中[14]张小芳袁孙彩霞袁张运刚袁等.急性白血病患者骨髓细胞形态和免疫表型同步检测的比较分析[J].国际免疫学杂志袁2016袁39渊5冤院442-445.[15]唐洁袁蒋能刚袁梁效功袁等.四色十抗体流式免疫表型分析方案在多发性骨髓瘤诊断中的价值[J].华西医学袁[16]AranaP袁PaivaB袁CedenaMT袁etal.Prognosticvalueof2017袁23渊3冤院419-424.国实验血液学杂志袁2015袁23渊1冤院190-194.clinicaltrials[J].Leukemia袁2017袁13渊14冤院133-140.[17]贺继刚袁李洪荣袁桂龙升袁等.小鼠骨髓间充质干细胞antigenexpressioninmultiplemyeloma院APETHEMA/GEMstudyon1265patientsenrolledinfourconsecutiveSCA-1+/CD45+/CD31+亚群自身抗凋亡基因研究[J].安徽医科大学学报袁2015袁50渊12冤院1757-1761.[18]冯婷婷袁甘建和袁吴南屏袁等.AIDS患者HAART治疗免疫重建过程中检测CD4+CD45RO+/CD45RA+CD127+T细胞的意义及其相关免疫调节分析[J].江苏医药袁2016袁42渊1冤院12-16.[19]严艳袁娄金丽袁禇蓓.不同试剂在流式细胞仪上检测CD45+尧CD4+细胞的效果评价[J].中国卫生检验杂志袁2015袁24渊22冤院3871-3874.[20]WangL袁ZhaiZW袁JiDB袁etal.PrognosticvalueofCD45RO渊+冤tumor-infiltratinglymphocytesforlocallyadvancedrectalcancerfollowing30Gy/10fneoadjuvantradiotherapy[J].InternationalJournalofColorectalDis鄄e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