除噬菌体的挑战实验

实验目的

1、利用噬菌体的一些生物特性,从自然环境中分离、纯化大肠杆菌噬菌体,掌握噬菌体分离纯化的基本原理和方法。在实验过程观察噬菌斑的形态,和细菌菌落进行对照加深印象。

实验原理

噬菌体是专性寄生物,所以自然界凡是有细菌分布的地方,都可发现其特异的噬菌体存在。如粪便与阴沟污水中含有大量大肠杆菌，固也能很容易地分离到大肠杆菌噬菌体。噬菌体颗粒可以存活（当然不能生长）。

噬菌体存在的特征是使含有特定宿主的菌悬液由浑浊变清亮或者在有宿主细胞生长的琼脂平板上形成透明的或浑浊的空斑,称噬菌斑。

实验器材 仪器设备:

500ml三角瓶、中试管、培养皿、无菌不锈钢涂布器、无菌吸管、无菌滤器（孔径0.22um)、恒温水浴锅、真空泵、恒温培养箱、灭菌锅、抽滤瓶等

试剂:大肠杆菌、三倍浓缩的牛肉膏蛋白陈液体培养基、含琼脂0.7%、2%的半固体、固体培养基、阴沟污水、无菌水等

1.（第一天，实验员准备）制备大肠杆菌菌悬液:37℃培养18小

时的大肠杆菌斜面一只,加无菌水5ml洗下菌苔，制成菌悬液。

2.(第二天）增殖培养:把40ml污水加到有20ml三倍浓缩的牛肉膏蛋白陈培养液的三角瓶中,再加入0.6 ml大肠杆菌菌悬液，37℃振荡培养24～48小时。

3.(第三天）制备裂解液:制备裂解液将以上混合培养液加入1.5ml离心管（每人两管就够了)4000r/min离心15分钟,将上清转移到无菌离心管中(每次使用要无菌操作,用完后保存起来,以备下次使用）。

4.(第四天）确证实验于肉膏蛋白陈琼脂平板上加一滴大肠杆菌悬液(约0.1ml），再用灭菌玻璃涂布器将菌液涂布成均匀的一薄层。

(b)待平板菌液干后,分散滴加数小滴滤液于平板菌层上面,里37℃培养过夜。如果在滴加滤液处形成无菌生长的透明噬菌斑,便证明滤液中有大肠杆菌噬菌体。

实验结果

绘出平板中噬菌斑的形态特征