控制菌检查用培养基的适用性检查操作规程
审核日期颁发部门质保部受控号 批准日期分发部门质量控制科质保部 1. 目的：
建立控制菌检查用培养基的适用性检查的标准操作规程，确保培养基的有效性和试验结果的科学性。
2．适用范围
本规程适用于微生物限度检查中所用控制菌培养基的适用性检查。 3．引用相关文件
《中华人民共和国药典2010年版一部》附录XIII C 微生物限度检查法4．培养基的适用性检查
控制菌检查用培养基的适用性检查项目包括促生长能力、抑制能力及指示能力的检查。
4.1.菌种
金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]，乙型副伤寒沙门菌[CMCC(B)50094]，大肠埃希菌[CMCC(B)44102]，铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104]。
实验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冻干粉菌株为0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证实验菌株的生物学特性。
4.2.菌液制备
接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，30～35℃培养18～24小时，取上述培养物1ml
用0.9％无菌氯化钠溶液做10倍递增稀释，一般金黄色葡萄球菌稀释至10-6，铜绿假单胞菌、大肠埃希菌稀释至10-7，枯草芽孢杆菌稀释至10-5，制成每1ml
含菌数为10-100cfu的菌悬液。
菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2～
8℃，可在24小时内使用。
4.3.检测项目及方法
控制菌检查用培养基的适用性检查项目包括促生长能力、抑制能力及指示能力的检查。各培养基的检测项目及所用菌种见下表1：
表1控制菌检查用培养基的促生长、抑制和指示能力检查 审核日期颁发部门质保部受控号 批准日期分发部门质量控制科质保部 控制菌检查培养基特性试验菌株 大肠埃希菌胆盐乳糖培养基 4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基
曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基促生长能力 抑制能力 促生长+指示能力 促生长+指示能力 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 大肠埃希菌
大肠菌群乳糖发酵培养基 乳糖发酵培养基
曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基促生长能力 抑制能力 促生长+指示能力 促生长+指示能力 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 大肠埃希菌
沙门菌营养肉汤培养基 四硫磺酸钠亮绿培养基
胆盐硫乳琼脂培养基或沙门、志贺氏属琼脂培养基 曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯琼脂 三糖铁琼脂培养基促生长能力 促生长能力 抑制能力 促生长+指示能力 促生长+指示能力 指示能力 乙型副伤寒沙门菌 乙型副伤寒沙门菌 金黄色葡萄球菌 乙型副伤寒沙门菌 乙型副伤寒沙门菌 乙型副伤寒沙门菌
铜绿假单胞菌胆盐乳糖培养基 溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基 绿脓菌素测定用培养基促生长能力 抑制能力 促生长能力 抑制能力 促生长+指示能力 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 大肠埃希菌 铜绿假单胞菌
金黄色葡萄球菌营养肉汤
甘露醇氯化钠琼脂培养基促生长能力 抑制能力 促生长+指示能力
抑制能力 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌
4.3.1液体培养基促生长能力检查
分别接种不大于100cfu的试验菌（见表1）于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。
4.3.2固体培养基促生长能力检查
取试验菌各0.1ml（含菌数50～100cfu）分别涂布于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。
4.3.3培养基抑制能力检查
接种不少于100cfu的试验菌（见表1）于被检培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最长时间下培养，试验菌应不得生长。
4.3.4固体培养基指示能力检查 审核日期颁发部门质保部受控号 批准日期分发部门质量控制科质保部
取试验菌各0.1ml（含菌数不大于100cfu）（见表1）分别涂布于被检培养基和
对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度及时间下培养。
4.3.5液体培养基指示能力检查
分别接种不大于100cfu的试验菌（见表1）于被检培养基和对照培养基中，在相
应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。 4.4.结果判定
液体培养基促生长能力检查时，与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好表明此培养基促生长能力符合要求。固体培养基促生长能力检查时，被检培养基与对照培养基上生长的菌落大小、
形态特征应一致表明被检培养基促
生长能力符合要求。培养基抑制能力检查时，相应试验菌应不得检出。固体培养
基指示能力检查时，被检培养基中试验菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反
应情况等与对照培养基一致表明此培养基的指示能力符合要求。液体培养基指示
能力检查时，与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌生长情况、指示剂反应
等与对照培养基一致表明此培养基的指示能力符合要求。 4.5.培养基的保存
配制的培养基应在凉暗处密闭保存，一般不得超过1周。
