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Tris-HCl及其他几种缓冲液配方

来源:五一七教育网
创作时间:二零二一年六月三十日

Tris是什么?有什么作用?TrisHCl,TrisEDTA如何配制?之马矢奏春创作

创作时间:二零二一年六月三十日 Tris:三羟甲基氨基甲烷三羟甲基氨基甲烷(Tris(hydroxymethyl)aminomethane,一般简称为Tris)是一种有机化合物,其分子式为(HOCH2)3CNH2.Tris被广泛应用于生物化学和分子生物学实验中的缓冲液的制备.例如,在生物化学实验中经常使用的TAE和TBE缓冲液(用于核酸的溶解)都需要用到Tris.由于它含有氨基因此可以与醛发生缩合反应 Tris为弱碱,在室温(25℃下,它的pKa为8.1;根据缓冲理论,Tris缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0到9.2之间.Tris碱的水溶液pH在10.5左右,一般加入盐酸以调节pH值至所需值,即可获得该pH值的缓冲液.但同时应注意温度对Tris的pKa的影响. 由于Tris缓冲液为弱碱性溶液,DNA在这样的溶液中会被去质子化,从而提高其溶解性.人们经常在Tris盐酸缓冲液中加入EDTA制成“TE缓冲液”,TE缓冲液被用于DNA的稳定和贮存.如果将调节pH值的酸溶液换成乙酸,则获得“TAE缓冲液”(Tris/Acetate/EDTA),而换成硼酸则获得“TBE缓冲液”(Tris/Borate/EDTA).这两种缓冲液通经常使用于核酸电泳实验中.

创作时间:二零二一年六月三十日

创作时间:二零二一年六月三十日

用途:有机合成中间体.在电泳缓冲液中同甘氨酸构成缓冲体系,稳定电泳过程中的PH值.在凝胶中也起到稳定PH的作用,只不外是TrisHCl缓冲体系. Tris缓冲液不单被广泛用作核酸和卵白质的溶剂,还有许多重要用途.Tris被用于分歧pH条件下的卵白质晶体生长.Tris缓冲液的低离子强度特点可用于线虫(C. elegans核纤层卵白lamin)的中间纤维的形成.Tris也是卵白质电泳缓冲液的主要成份之一.另外,Tris还是制备概况活性剂、硫化增进剂和一些药物的中间物.Tris也被用作滴定标准物. 1 M TrisHCl (pH7.4,7.6,8.0)组份浓度 1 M TrisHCl配制量 1L配制方法:

1.称量121.1 g Tris置于l L烧杯中.

2.加入约800 ml的去离子水,充沛搅拌溶解.3.按下表加入浓HCl量调节所需要的pH值. pH

值 浓

HCl7.4

70

ml7.6 约60 ml8.0 约42ml

4.将溶液定容至1 L.5.高温高压灭菌后,室温保管.注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变动不同很年夜,温度每升高1℃,溶液的pH值年夜约降低0.03个单元.

1.5 M TrisHCl (pH8.8)

组份浓度 1.5 MTrisHCl配制量 1 L配制方法

1.称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中.2.加入约800 ml的去离子

创作时间:二零二一年六月三十日

创作时间:二零二一年六月三十日

水,充沛搅拌溶解.3.用浓HCl调节pH值至8.8.4.将溶液定容至1 L.5.高温高压灭菌后,室温保管.注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变动不同很年夜,温度每升高1℃,溶液的pH值年夜约降低0.03个单元.

TE即TrisEDTA buffer(10mM Tris,1mM EDTA,pH7.4 pH7.6 pH8.0).

经常使用分子生物学试剂,用于DNA的溶解等.

配制1 0×TE Buffer (pH7.4, 7.6,8.0) 组份浓度: 100 mM TrisHCl,10 mM EDTA配制量: 1 L配制方法:

1.

量取下列溶液,置于l L烧杯中.

1 M TrisHCl Buffer(pH7.4,7.6,8.0) 100 ml500 mM EDTA(pH8.0) 20 ml

2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水,均匀混合. 3.将溶液定容至1 L后,高温高压灭菌.4.室温保管.

创作时间:二零二一年六月三十日 创作时间:二零二一年六月三十日

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