细菌生长曲线的测定

一、 实验目的

1、 了解细菌生长曲线特点及测定原理 2、 学习用比浊法测定细菌的生长曲线 二、 实验原理

大多数细菌的繁殖速率很快，在合适的条件下，一定时期的大肠杆菌细胞每20min一次。将一定量的细菌转入新鲜液体培养基中，在适宜的条件下培养细胞要经历延迟期，对数期，稳定期和衰亡期四个阶段。以培养时间为横坐标，以细菌数目的对数或生长速率为纵坐标作图所绘制的曲线称为该细菌的生长曲线。不同的细菌在相同的培养条件下其生长曲线不同，同样的细菌在不同的培养条件下所绘制的生长曲线也不相同。

测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实验采用比浊法测定，由于在一定的范围内，微生物细胞浓度与透光度成反比，与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简便。 三、 实验材料

1、 菌种：大肠杆菌

2、 培养基： LB液体培养基/牛肉膏蛋白胨液体培养基

3、 仪器和器具：721分光光度计，比色杯(1cm)，恒温摇床，无菌吸管(5mL)，大试管，

三角瓶(250mL)。

四、 实验流程

标记→接种→培养→测定 五、 操作步骤

1、 标记：取11支无菌大试管，用记号笔分别标明培养时间，即0，1.5，3，4，6，8，

10，12，14，16和20h。

2、 接种：分别用5mL无菌吸管吸取2.5mL大肠杆菌过夜培养液(培养10~12h)转入盛有

60 mL 液体培养基的三角瓶内，混合均匀后分别取5mL混合液加至上述标记的11支无菌大试管中。

3、 培养：将已接种的试管置摇床37℃振荡培养(振荡频率200~250r/min)，分别培养0，

1.5，3，4，6，8，10，12，14，16和20h，将标有相应时间的试管取出，立即放4℃贮存，最后一同比浊测定其光密度值。

4、 比浊测定：用未接种的液体培养基作空白对照，选用600nm波长进行光电比浊测定。

从早取出的培养液开始依次测定，对细胞密度大的培养液用液体培养基适当稀释后测定，使其OD600在0.1~0.65之内 (测定OD值前，将待测定的培养液振荡，使细胞均匀分布)。

六、 注意事项

1、 测定OD值时，要求从低浓度到高浓度测定。 2、 严格控制培养时间。 七、 实验结果

1、 将测定的OD值填入下表： 培养时间/h OD600 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20 2、 以上述表格中的时间为横坐标，OD600值为纵坐标，绘制大肠杆菌的生长曲线。 八、 思考

1、 根据实验数据画出生长曲线，并说明细菌生长特征。

2、 若同时用平板计数法测定，所绘出的生长曲线与用比浊法测定绘出的生长曲线有何

差异？为什么？

3、 次生代谢产物的大量积累在哪个时期？根据细菌生长繁殖的规律，采用哪些措施可

使次生代谢产物积累更多？