黑龙江农业科学２０１ ５（４）：１４８～１５ｌ Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 食鼠蔑 车羲－微生 桔梗总皂苷对秀丽隐杆线虫生物活性的影响 黄银生 ，王晓雅。，李静。，赵 明 ，杨京霞。 （】＿．阜阳师范学院物理与电子工程学院，安徽阜阳２３６０３７；２．阜阳师范学院抗衰老中草药安 徽有工程技术研究中心，安徽阜阳２３６０３７） 摘要：为研究桔梗总皂苷对秀丽隐杆线虫生物活性的影响，分析了不同浓度桔梗总皂苷对线虫寿命、体长、身 体摆动次数和产卵数的影响。结果表明：培养基桔梗总皂苷浓度为ｏ．５ ｇ・ｍＩ 时，对线虫的寿命、体长、活动 状况和产卵数均有促进作用；培养基桔梗总皂苷浓度为１．５ ｇ・ｍＩ 时，未观察到有线虫生长。 关键词：桔梗总皂苷；秀丽隐杆线虫；生物活性 中图分类号： ４６．６文献标识码：Ａ文章编号：１００２—２７６７（２０１５）０４—０１４８—０４ Ｉ）（）Ｉ：１０．１１９４２／ｊ．ｉｓｓｎ１００２—２７６７．２０１５．（）乱０】４８ 桔梗做为药食同源的传统中药材，在我斟具 有较大的销量，同时由于疗效广泛，常应用于临 床，多治疗咳嗽痰多、咽痛等，近年来各国学者对 桔梗的化学成分和药理作用进行了较为系统的研 究。研究表明。桔梗Ｉ｛Ｊ主要含有桔梗皂苷、多糖、 ５０ ｇ于烧杯中，加入１０侪 ｑＪ醇，放人 （）Ｄ（１ 水浴 锅巾加热１ ｈ，过滤，滤渣冉提取一次。合并滤液 浓缩至小体积，过已经处理好的ＡＢ一８大孔树脂 柱，依次用水和７Ｏ 乙醇洗脱，收集乙悼液．用水 饱和的正丁醇萃取，合并正ｒ醇层，水浴浓缩后得 黄酬、酚酸和聚炔等化合物 ｝，其巾皂苷类为桔梗 的主要化学成分，包括桔梗酸类、桔梗二酸类和远 桔梗总皂苷备Ｊ＿ｆｊ 】。 １．２．２ 液体培养基的配制 精密称取０．３ ｇ氯 化钠和０．２５ ｇ蛋闩胨于２５０ ｍＩ 蒸馏瓶【１＿１，加入 志酸类 ’。药理作用研究表明，桔梗皂苷Ｄ具有 抗炎镇痛、镇痰祛咳、调血脂的作用和桔梗总皂苷 具有抗肥胖作用，桔梗的其它提取物还有抑制脂 质过氧化、清除超氧化物歧化酶等的抗氧化作用。 本文以秀丽隐杆线虫口 为模式生物，研究桔梗总 ｌ ｔｏｏｌ・Ｉ 。。磷酸缓冲液２。５ ｍＩ 、蒸馏水９７。５ ｍｌ ， 于高压灭菌锅中１２１℃灭菌３０ ｍｉｎ，加入ｌ ｍｏｌ・Ｉ 硫酸镁溶液和１ ｍｏｌ・Ｉ 氯化钙溶液各０．１ ｍｌ ， 混匀后待用。 皂苷对线虫生命周期、活动能力、体长和产卵情况 等生物活性的影响，探讨桔梗总皂苛在延缓衰老 方面的作用。 ｌ＿＿２．３ 大肠杆菌的接种 取液体培养鹾倒入４ 个平板，吸取１００ Ｉ 大肠杆菌菌液，接人倒好的培 养基平板中待用。 １．２．４ 秀丽隐杆线虫的培养 Ｉ及取２００ ＩＩ Ｍ９ 缓冲液冲到线虫培养皿上，使线虫悬浮于缓冲液 中，用移液器吸取缓冲液，接种于液体培养肌中， ２Ｏ℃恒温箱中培养。 ｌ材料与方法 １．１ 材料 供试材料主要有桔梗（市售），Ｅ．ｃｏｌｉ（）Ｉ’５０、 Ｎ 野生型秀丽隐杆线虫、９ｓ 乙醇、蒸馏水、蛋白 胨、Ｍ。缓冲液等。供试仪器设备主要有ＳＷ—ＣＴ— ＩＦ型超净 Ｔ＝作台、ＨＶＥ一５０高压灭菌锅、 ＡＲ２２４ＣＮ电子天平、Ｉ｛Ｈ—Ｚ型数 恒温水浴锅、 １．２．５ 秀丽隐杆线虫的同步化 吸取，１００ ＭＩ 线 虫培养基液体于ＥＰ管巾．加入１ ｍＩ 裂解液放嚣 １０ ｍｉｎ，然后５ ０００ ｒ・ｍｉｎ。离心１ ｒａｉｎ，弃上清，Ｗ ＳＭＺ—ｌ６８体视显微镜。 １．２ 方法 用１ ０００ Ｌ Ｍ９缓冲液冲洗离心３次，每次 ３ ０００ ｒ・ｍｉｎ 离心１ ｒａｉｎ，弃上清，向ＥＰ管中肌 １．２．１ 桔梗总皂苷的提取 精密称取桔梗粉末 入４００ Ｌ Ｍ９缓冲液振荡摇匀，放人２０℃恒温箱 巾培养１２ ｈ．获得同步化Ｉ ．一龄幼虫。倒４个平 收稿日期：２ｏ１ １２－０９ 基金项目：安徽省大学生创新创业训练汁划资助项目（ＡＨ 板，在其中３个平板中分别加入２００ Ｉ 不同浓度 的桔梗总皂苷提取液，将同步化的Ｉ 幼虫接人４ 个平板中培养 。 １．２．６ 测定项目与方法 ①线虫寿命以及产卵 ２０１ ３１０３７ｊ０５ｊ，；阜硐师范学院省级平台委托专项资助项 Ｈ（２Ｏ１ ４ＫＳ１ ＺＸ０２）；阜阳师范学院自然科学研究资助项 蹦（２ｏ１ ２ＦＳＫＪ０１ＺＤ，２ｏ１ ３ＦＳＫＪ１ ７） 第一作者简介：黄银生（１９７８一）．男．ｔｌＪ东省临沂市人，硕士， 讲师，从事计算物理研究。Ｅ—ｍａｉｌ：８１ ３１３１４０＠ｑｑ．ＣＯＩｎ １４８ 数的测定：把接种Ｉ ；幼虫的当天记为第０天，连 ４期 试验分析。 献． 黄银生等：桔梗总皂苷对秀丽隐杆线虫生物活性的影响 食用茵 ・畸 药 微生物 Ｌ４ｊ郑繁慧－刘文丛，郑毅男，等・桔梗总皂苷－ｑ桔梗总次皂苷祛 分析，所以要日月确该成分和线虫的作用需进一步 痰作用的ｔｔ较［¨・吉林农业大学学报 ２０１１，３３（５）： 。 ． ．Ｅｓ］ 量［Ｊ］．＿】］付文卫，窦德强・裴月湖・桔梗化学成分和生物活性研究进 ［２］郭丽’张村，李丽＇等・中药桔梗的研究进展［Ｊ］・中国中药杂 言景奎，张 Ｅ色法恻 梗中桔梗总皂苷的含 中国现代应用药学杂志，２Ｏ０８，２（２５）．．５８－６０． ．展［Ｊ］・沈阳药科大学学报，２。。６，２。（３）：１８ 一ｌ８５・ ［６３ 何潇潇响ｆＪ］．人生总皂苷中水溶性成分对于线虫生命活动的影 吉林大学学报：理学版，２ｏ１２，５Ｏ（１）：】６７１—５４８９． ’ ‘ ［３］庞林海妻： 竺 ： 。 ：： ．８１．一 ．２‘。 。． ． 。 ．。 ．，。 ［７］陈瑞战．超高压提取人生皂苷丁艺及机理［Ｉ）］．吉林：吉林 札爱芳，李孝军，等．秀丽隐杆线虫培养特性与保存 Ｌ．．．，．．～ 方法研究［ｊ］．浙江农业学报，２００７，１９（Ｉ）：３４—３６．一 ／＼一ｆ＇…，－ｏ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｔｏｔａｌ Ｓａｐｏｎｉｎｓ ｆｒｏｍ Ｐｌａｔｙｃｏｄｏｎ ｇｒａｎｄｉ ｆｌｏｒｕｍ ｏｎ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓ ＨＵＡＮＧ Ｙｉｎ—ｓｈｅｎｇ ，ＷＡＮＧ Ｘｉａｏ－ｙａ ，ＬＩ Ｊｉｎｇ ，ＺＨＡＯ Ｍｉｎ ，ＹＡＮＧ Ｊｉｎｇ－ｘｉａ。 （１．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｃｓ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｆｕｙａｎｇ Ｔｅａｃｈｅｒｓ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｆｕｙａｎｇ．Ａｎｈｕｉ， ２３６０３７；２．Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ａｎｔｉ—ａｇｉｎｇ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｈｅｒｂａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｆｕｙａｎｇ Ｔｃａｃｈｅｒｓ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｆｕｙａｎｇ， Ａｎｈｕｉ ２３６０３７） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｓａｐｏｎｉｎｓ ｏｆ Ｐｌａｔｙｃｏｄｍ ｇｒａｎｄｉ ， ， “Ⅲｏｎ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｃａｅｎｏｒｋａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇ“” ．ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｓａｐｏｎｉｎｓ ｏｆ Ｐｌａｔｙｃｏｄｏｎ ｇｒａｎｄｉＪ ｌｏｒｕｍ Ｏｎ ｌｉｆｅ．ｂｏｄｙ ｌｅｎｇｔｈ，ｓｗｉｎｇ ｔｉｍｅｓ ａｎｄ ｅｇｇｓ ｌａｙｉｎｇ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｍｅｄｉｕｍ ｗｉｔｈ ０．５ ｇ・ｎｆｌ ｔｏｔａｌ ｓａｐｏｎｉｎｓ ｏｆ Ｐｌａｔｙｃｏｄｏｎ ｇｒａｎｄｉｆｈ，ｒｕｍ ｈａｄ ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｌｉｆｅ，ｂｏｄｙ ｌｅｎｇｔｈ。ｓｗｉｎｇ ｔｉｍｅｓ ａｎｄ ｅｇｇｓ ｌａｙｉｎｇ．Ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ０。５ ｇ・ｍＬ一，ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｎｅｍａｔｏｄｅ ｉｎ ｔｈｅ ｍｅｄｉｕｍ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｔｏｔａｌ ｓａｐｏｎｉｎｓ ｏｆ Ｐｌａｔｙｃｏｄｏｎ ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｍ；Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓ；ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃ＊ｉｖｉｔｙ （上接第１２８页Ｊ Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｓｏｌｉｄ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｔｅａ ｏｆ Ｗｉｌｄ Ｐｏｒｉａ ＣＯＣＯＳ ａｎｄ Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ ｉｎ Ｐｕｅｒ ＺＨＡＮＧ Ｃｈｕａｎ－ｌｉ ，ＸＩＯＮＧ Ｃｈａｎ￣－ｙｕｎ ，ＹＡＮＧ￣＇ａ－ｊｕｔｒｌ ，ＨＥ Ｓｕ－ｍｉｎｇ ，ＧＵＩ Ｘｕｅ－ｍｅｉ ，ＺＨＯＵ Ｙａｎ ， ＬＩ Ｗａｎ—ｗｅｉ。 （１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ｃｒｏｐｓ，Ｙｕｎｎａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｐｕｅｒ，Ｙｕｎｎａｎ ６６５０００；２．Ｙｕｎ— ｎａｎ Ｐｕｅｒ Ｓｅｅｄｓ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ Ｓｔａｔｉｏｎ，Ｐｕｅｒ，Ｙｕｎｎａｎ ６６５０００；３．Ｐｕｅｒ Ｓｏｎｇｍａｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ Ｃｏｍｐａｎｙ １．ｉｍｉｔｅｄ，Ｐｕｅｒ，Ｙｕｎｎａｎ ６６５０００） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｐｒｏｍｏｔｅ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｏｗ—ｑｕａｌｉｔｙ ｔｅａ。ｔａｋｉｎｇ ｆｉｖｅ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｔｅａ ａｓ ｔｈｅ ｍａｉｎ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｃｕｌｔｉｗ￣ｔｉｏｎ ｏｆ ｗｉｋＩ Ｐｏｒｉａ ＣＯＣＯＳ ａｎｄ Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｔ’ｉｄｕｍ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｔｅａ，ｔｈｅ ｍｙｃｅｌｉａ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｐｏｒｉａ ｃｏｌ７０Ｓ ａｎｄ Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ ａｎｄ ｔｅｎ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｔｅａ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｔｏ ｓｃｒｅｅｎ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｓｏｌｉｄ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｔｅａ ｏｆ ｗｉｌｄ Ｐｏｒｉａ ＣＯＣＯＳ ａｎｄ Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｈｅ ａｃｃｏｒｄａｎｃｅ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｎａｔｉｏｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｗｉｌｄ Ｐｏｒｉａ ＣＯＣＯＳ ａｎｄ Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ ｍｙｃｅｌｉａ ｃｏｕｌｄ ｇｒｏｗ ｉｎ ｆｉｖｅ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｔｅａ ｍｅｄｉｕｍ，ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｐｏｉｎｔ ｏｆ ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ｇｒｏｗｔｈ，ｔｈｅ ｍｅｄｉｕｍ ａｄｄｅｄ ｗｉｔｈ ｆｉｎｅ ａｎｄ ｓｕｎｎｉｎｇ ｗａｓ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｗｉｌｄ Ｐｏｒｉａ ＣＯＣＯＳ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｔｅａ．Ｏｎ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｈａｎｄ，ｔｈｅ ｍｅｄｉｕｍ ａｄｄｅｄ ｗｉｔｈ ｆｉｎｅ ａｎｄ ｉｉｑｕｏｒ ｗａｓ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｗｉｌｄ Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ ｔｅａ；Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ １０ ｓａｍｐｌｅｓ ａｃｃｏｒｄｅｄ ｗｉｔｈ ｎａｔｉｏｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｗｉｌｄ Ｐｏｒｉａ ＣＯＣＯＳ；ｗｉｌｄ Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ；ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｔｅａ；ｔｅａ ｍｅｄｉｕｍ ｌ５１
