江西农业学报２０１６，２８（１２）：８０—８２ ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｊｘｎｙｘｂ．ｃｏｍ Ａｃｔａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅ Ｊｉａｎｇｘｉ ＤＯＩ：１０．１９３８６／ｊ．ｃｎｋｉ．ｊｘｎｙｘｂ．２０１６．１２．１６ ＮｔＭＹＣｌａ转录因子的克隆与功能初步分析 郭红祥 ，李富欣孙，刘巧真。一，李素敏 ，郭爱芳 ，李斐 ，丁超 （１．河南农业大学生命科学学院，河南郑州４５０００２；２．河南省烟草公司济源市公司，河南济源４５４６５０； ３．河南省农业科学院烟草研究中心，河南许昌４６１０００；４．河南省获嘉县种子公司，河南获嘉４５３８２２） 摘要：从烟草根系中克隆ＮｔＭＹＣＩａ基因，构建表达载体并在烟草中瞬时表达，探讨了ＮｔＭＹＣｌａ转录因子在烟碱生 物合成中的作用。转基因烟草中的ＮｔＭＹＣｌａ表达显著升高，表明成功构建了ＮｔＭＹＣｌａ表达载体并转化了烟草；转基因 烟草中的ＰＭＴ表达量显著升高，表明ＮｔＭＹＣｌａ能够正烟碱的合成；茉莉酸与干旱处理烟草后，检测到ＮｔＭＹＣｌａ和 肼 的表达量显著升高，表明在茉莉酸、干旱促进烟碱合成的生物学过程中，ＮｔＭＹＣ１ａ具有正的功能。 关键词：转录因子；ＮｔＭＹＣ１ａ；烟碱；茉莉酸；干旱 中图分类号：Ｑ７８５文献标志码：Ａ文章编号：１００１—８５８１（２０１６）１２—００８０一ｏ３ Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒ ＮｔＭＹＣｌａ ｆｒｏｍ Ｔｏｂａｃｃｏ ＧＵＯ Ｈｏｎｇ－ｘｉａｎｇ ，ＬＩ Ｆｕ－ｘｉｎ弘，ＬＩＵ Ｑｉａｏ－ｚｈｅｎ 一，ＬＩ Ｓｕ－ｍｉｎ ，ＧＵＯ Ａｉ－￣ｎｇ ，ＬＩ Ｆｅｉ ，ＤＩＮＧ Ｃｈａｏ （１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｈｅｎａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ ４５０００２，Ｃｈｉｎａ；２。Ｊｉｙｕａｎ Ｔｏｂａｃｃｏ Ｃｏｍｐａｎｙ ｏｆ Ｈｅｎａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｊｉｙｕａｎ ４５４６５０，Ｃｈｉｎａ；３．Ｔｏｂａｃｃｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｈｅｎａｎ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｘｕｃｈａｎｇ ４６１０００，Ｃｈｉｎａ；４．Ｓｅｅｄ Ｃｏｍｐａｎｙ ｏｆ Ｈｕｏｊｉａ Ｃｏｕｎｔｙ ｉｎ Ｈｅｎａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｈｕｏｊｉａ ４５３８２２，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｇｅｎｅⅣ￡肘ｙＣｌａ ｉｎ山ｅ ｒｏｏｔｓ ｏｆ ｔｏｂａｃｃｏ ｗａｓ ｃｌｏｎｅｄ．ｉｔＳ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｗａｓ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ａｎｄ ｔｒａｎｓｉｅｎｔｌｙ ｅｘ— ｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｔｏｂａｃｃｏ．ａｎｄ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＮｔＭＹＣＩａ ｉｎ ｔｈｅ ｂｉｏｓｙｎｔＩｌｅｓｉｓ ｏｆ ｎｉｃｏｔｉｎｅ ｗａｓ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＮｔＭＹＣ１ ａ ｉｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｔｏｂａｃｃｏ ｐｌａｎｔｓ ｗａｓ ｎｏｔａｂｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｗｉｔｈ Ｎｔ・ ＭＹＣｌａ ｈａｄ ｂｅｅｎ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｉｎｔｏ ｔｏｂａｃｃｏ ｐｌａｎｔｓ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ Ｐ Ｔ ｉｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｔｏｂａｃｃｏ ｐｌａｎｔｓ ｗａｓ ｒｅ． ｍａｒｋａｂｌｙ ｅｎｈａｎｃｅｄ，ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ ｔｈａｔ ＮｔＭＹＣ ｌ ａ ｃｏｕｌｄ ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｔｈｅ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｎｉｃｏｔｉｎｅ，Ａｆｔｅｒ ｔｏｂａｃｃｏ ｐｌａｎｔｓ ｗｅｒｅ ｔｒｅａ— ｔｅｄ ｗｉｔｈ ｌａｓｍｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｏｒ ｄｒｏｕｇｈｔ，ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｂｏｔｈ ＮｔＭＹＣ１ｎ ａｎｄ ＰＭＴ ｉｎ ｔｈｅｍ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ｓｈｏｗｉｎｇ ｔｈａｔ ＮｔＭＹＣ １ ｐｌａｙｅｄ ａ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｒｏｌｅ ｉｎ ｎｉｃｏｔｉｎｅ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｐｒｏｍｏｔｅｄ ｂｙ ｊａｓｍｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｏｒ ｄｒｏｕｇｈｔ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ；ＮｔＭＹＣ １ ａ；Ｎｉｃｏｔｉｎｅ；Ｊａｓｍｏｎｉｃ ａｃｉｄ；Ｄｒｏｕｇｈｔ ＭＹＣ类转录因子是ｂＨＬＨ转录因子超家族中的 一Ｇ—ｂｏｘ元件对其表达极其重要Ｉｓ］。２０１０年Ａｎｄｒｅａ Ｔ 等报道ｂＨＬＨ家族转录因子ＮｂｂＨＬＨ１和ＮｂｂＨＬＨ２ 员 ，编码植物中髓细胞组织增生蛋白（Ｍｙｅｌｏｃｙｔｏ． ｍａｔｏｓｉｓ ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＭＹＣｓ）。ＭＹＣ的识别序列多为Ｇ— ｂｏｘ ＣＡＣＧＴＧ 。ＭＹＣ转录因子具有多种调节功能， 能与ＰＭＴ的启动子元件Ｇ－ｂｏｘ相结合激活启动子， 正向烟碱的合成。敲除基因后，Ⅳ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ 的烟碱合成基因下调，叶片烟碱含量降低 。另外， Ｓｈｏｊｉ Ｔ等２０１１年的ＥＭＳＡ实验显示ＮｔＭＹＣ２ｂ能与 ＰＭＴ的Ｇ－ｂｏｘ互作。实验已经证明ＮｔＭＹＣ２基因参 参与许多生理与发育过程，如光信号、开花结实、根 的发育，以及虫咬、干旱、低温等各种胁迫应答。茉 莉酸（ｊａｓｍｏｎｉｃ ａｃｉｄ，简称ＪＡ；茉莉酸甲酯，简称ＭｅＪＡ 一）在植物体内众多的基因，其中烟碱合成 的路径已基本被研究清楚，ＭＹＣ是茉莉酸类激素响 与了打顶、伤害诱导、茉莉酸对烟碱合成的过 程 。ＭＹＣ１ａ和ＭＹＣ２ａ／２ｂ同属ＭＹＣ转录因子家 应途径中的核心转录因子，已有文献报道ＭＹＣ２参与 ＪＡ活化的烟草生物碱合成 。 ＭＹＣ家族与烟碱的合成密切相关。２００４年 Ｂｉｎｇｆａｎｇ Ｘ等已证实烟碱合成关键酶ＰＭＴ启动子的 族，那么ＭＹＣ１ａ是否参与对烟碱合成的呢？因 此，本文从烟草中克隆ＭＹＣ１ａ基因，构建过表达载 体，探讨了ＮｔＭＹＣ１ａ转录因子在烟碱生物合成中的 作用，旨在为阐明烟草中烟碱生物合成的机制奠 收稿日期：２０１６－０１－３０ 基金项目：河南省烟草公司科技重点项目（ＨＹＫＪ２０１３０８）。 作者简介：郭红祥（１９７４一），男，河南获嘉人，教授，博士，主要从事烟草生理生化研究工作。 并列第一作者：李富欣（１９７０一），男， 河南宜阳人，高级农艺师，博士，主要从事烟叶生产工作。 通讯作者：刘巧真。 ｌ２ 郭红祥等：ＮｔＭＹＣＩａ转录网 的妃降Ｌｊ功能初步分析 ８ｌ 定 础 ｌ材料与方法 １．１ 实验材料 从人…收戕培娴 Ｉｆ，种Ｋ３２６的根系， 液氮冷 冻处列！ ， 一８（） 卜你 。收３ Ｊ】龄、Ｋ势 致的 Ｉ！ｌ＇ｆ川Ｊｌ００ ｔｘｍｏｌ／Ｉ Ｍ 进 处理，在处删２４ ｈ后 取样，川液瓤冷冻，一８０ 侏仃。取３月龄、Ｋ势－敛 的娴 ， Ｉ ｌ 处 ２０ ｄ 取样，用液氮冷冻，～８０ ｃ【：保 、 １．２烟草根系ＲＮＡ提取及ｃＤＮＡ合成 川．ｒｌ｛Ｉｚ｛）１法从娴 ｝ＩＩ扶得总ＲＮＡ， ｏｎｅ Ｓｔｅｐ ｌ｝ｒｉｍｅＳ｛．ｒｉｐｌ ’＿ＰＣＲ Ｋｉｔ（．ｒａＫａＲａ公司）反转埘之牛成 ｅＤＮＡ。 １．３克隆烟草的ＮｔＭＹＣＩａ基因 根 ＭＹ（ １ ａ（ＧｅｎＢｍｉｋ髓求号ＧＱ８５９１５８）没计一 引物，从娴 Ｋ３２６的ｃ１）ＮＡ ｌｆ１兜隆到完 的ＣＩ）Ｓ序 列 Ｉ・ ： ＴＣ．ｒＡＧＡ ＡＡＧＣ ＣｒｒＧＣＡＧＧＧＧＣＣＣＧＧＧＡ ｌ、＿ ＧＡＣｑ’（ Ａ—Ｉ ｒＡＣＡＧＣ～１ ＦＡＣＣＣＡＣ：Ｒ： Ｉ＇ＣＧＣＣＣ～Ｉ Ｉ’ＧＣＴ— ＣＡＣＣＡ．ｒ ．ｒ ＦＰＡＧ｛：（ Ｔ（ ． Ｉｌ１ＴＣＡＧＣＡＡ（：－ｒｃ－ｒ（卜戈０ 线处分刖为Ｓｍａ Ｉ干¨Ｋｔ． ｌ胁切化点）。 １．４构建表达载体ｐＳ１３００－ＮｔＭＹＣ１ａ 将ＮＩＭＹＣｌ ａ ＰＣＲ Ｊ 物切胶…收。利川Ｓｍａ Ｉ、 ｎ Ｉｌ～｝ＪＪ牌ｘ寸ｌ ｓ１ ３００找ｆ水进ｉ 舣酶切，之后切胶 【【ｊｌ收线 城仆。利川无缝 降试剂盒进行连接． １．５烟草过表达载体的瞬时表达及检测 选取８～１ ０ ＩＩ¨｝ｆ】、 Ｋ良女，的娴株，将农干ｒ菌 ＧＶ３１０ｌ 株（ｐＳＩ ３００一ＮｔＭＹＣｌ ａ）注射人烟 ；３～４ ｄ后收样，取样Ｈ寸 墩 ｜身ｔ邮化，川液氮速冻后 卜一 ８０ 冰 保 。娴 总ＲＮＡ的挺取采川ＴＲｌｚｏｎ法。 以总１／ＮＡ的反转求产物ｃ１）ＮＡ为模板，利川娴 的 Ａｃｔｉｎ（（；ｃｎＢａｎｋ：ＡＦＩ２６８１０）干１：为内参基 ，进 灾时 荧光定 ＲＴ—Ｉ）ＣＲ检测，Ｊ）￣ＨｆＪ各引物序列 １。 表１ ＲＴ—ＰＣＲ检测所用引物名称及其序列 ｊｌ物 称 Ｊ 列 ＮｔＡｃｔｉｎ ＮｔＭＹＣｌ ｎ ＮｔＭＹＣＩ】１ ＮｔＭＹＣ２ａ ＮｌＭＹＣ２ｈ ＮＩ｝’ＭＴ ｑＰＣＲ柃测分析使川ＳＹＢＲ—Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑ ”ｌ１ （ ｒａＫａＲａ）试剂盒进行。反麻体系ｊｎ１卜：２ ｌ ｃ１）ＮＡ， ０．５ １ ｌ｜、反弓ｌ物，ｌ ２．５ Ｉ ２ｘＳＹ｝｛｜｛一１）ｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｆａｑ Ｉ１和９．５ Ｌ水。按＿Ｉｌ《｛以卜 序进ｉ ：９５℃３０ Ｓ；９５ ５ ｓ，５７ ３０ ｓ，７２ ３０ ｓ，共４０个循环 ．每个样 ＾甄复测定３次 ２结果与分析 ２．１ ＮｔＭＹＣｌａ基因的克隆与过表达载体的构建 以娴 的ｃＤＮＡ为模板克隆ＮｔＭＹＣＩ ｎ ，得 到２０４６ ｂｐ的条带（１颦Ｉ １），测序分析 叫 ＮｔＭＹＣ１ｎ 『大】序列 致。…收ＰＣｌｌ 物连接ｐｓｌ３００载体，转 化人肠杆菌ＤＨ５ｃ￣，筛选…性克隆。 ２为双酶切分 析结果，Ｈ的条带分别 ｊ ｐｓｉ ３００载休的人小和Ｎｔ— ＭＹＣｌａ的人小一敛。 Ｍ ５０００ ｂｐ ３０００ ｂｐ ２００｛１ ｂｐ ∞ ∽ 叩 图１ ＰＣＲ扩增ＮｔＭＹＣ１ａ结果 Ｍ １００００ ｂｐ ６０００ ｂｐ ４０００ ｂｐ ２００（｝ｂｐ ０００ ｂｐ ５００ ｂｐ ２５０ ｂｐ 图２ ｐｓ３００一ＮｔＭＹＣｌａ双酶切鉴定结果 ２．２ ＮｔＭＹＣｌａ的瞬时表达分析 从｝冬１ ３＿口ｆ以 …： 刈‘照Ｉ１ ｌ 士ＩＩ比，转化过表达 绒体ｐｓ３００一ＮｔＭＹＣ１ ａ叶片巾的ＮｔＭＹＣ１ｎ表达量Ｉ 升 并，增加Ｊ，２．９侪，表明转Ｊ １人Ｉ能够增ＪＪＩＩ ＮｔＭＹＣｌｎ的表达；过表达载体ｐｓ３００一ＮｔＭＹＣｌ ａ ｘ，Ｊ ．！！《｛ｐｓ３００ｃｋ瞬时 达ＩＪ ；‘干【ｊ比，ＰＭ７ 达 ｊ－升 并，增加＿ｒ ４．６俯．衷ｌ｛』】ＮｔＭＹＣ１ ａ埘娴协扼合成有正洲 控作川。 ２．３茉莉酸对烟碱合成相关基因表达的影响 茉莉酸是凋控 碱合成的・种 嘤植物激素 ｔ｝Ｍ＇１ 足烟碱合成过 －Ｉ１的重要限迷怫。从 ４ －Ｊ． 以行出，茉莉酸处 娴 后。ＰＭＴ的 达＿ｌＩ 升高近５ ８２ 江西农业学报 ２８卷 喜＿ 茛 函醐 倍，表明烟碱合成能力显著增加。同时也检测到 ．６ ５ ４ ３ ２ ｌ ０ ＭＹＣｌａ、ＮｔＭＹＣ１ｂ、ＮｔＭＹＣ２ａ、ＮｔＭＹＣ２ｂ基因的表达量 有不同幅度的升高，其中以ＮｔＭＹＣｌａ基因的表达量 升高幅度最小，说明Ｎ￣ＭＹＣｌａ在茉莉酸烟碱合 成中的作用相对较小。 ｆＹＣｌｎ ＰＭＴ 基因 图３ ＭＹＣｌａ和ＰＭＴ在转基因烟草中的表达分析 基凼 图４茉莉酸对烟碱合成相关基因表达的影响 ２．４干旱对烟碱合成相关基因表达的影响 干旱是烟碱合成的一种非生物胁迫因素。从 图５中可以看出，干旱胁迫能使ＰＭＴ的表达量升高２．３ 倍，同时ⅣｚＭＹＣ１ａ、ＮｔＭＹＣ１ｂ、ＮｔＭＹＣ２ａ、Ｍ ＹＣ２ｂ基 因的表达量分别升高４．９、３．１、１．２、１．３倍，表明舭一 ＭＹＣｌａ在干旱烟碱合成中起重要作用。 ＭＹＣｌａ ＭＹＣｌｂ Ｍ．ｖ，ｃ２ａ ＭＹＣ２ｂ ＰＭＴ 基因 图５干旱对烟碱合成相关基因表达的影响 ３讨论 烟碱的合成受到众多因素的影响且机制极 靛 函醐 其复杂，生物胁迫与非生物胁迫都影响烟碱的合成。６ ５ ４ ３ ２ ｌ Ｏ 如打顶、抹权、虫咬会导致烟碱含量增加［６－８ ３，干旱、 低温等不利环境因素也会影响到烟碱的合成。另外， 植物激素也是烟碱合成的重要因素，如茉莉酸、 脱落酸、生长素等。在烟草的栽培中，为了提高烟叶 质量，往往对烟株进行打顶，去除烟草的顶端生长优 势。打顶会引起烟株发生一系列的生理变化，例如根 系的二次生长、植物激素源改变、烟碱含量迅速增加 等 。 。烟株打顶是一种伤害诱导，能引起ＪＡ含量 的升高，ＪＡ能促进根系合成烟碱，ＭＹＣ２转录因子家 族参与这一烟碱合成的过程 。本文结果显 示茉莉酸能够大幅度促进ＭＹＣ２ａ／２ｂ转录因子的表 达，而ＭＹＣｌａ的表达量变化较小，说明打顶主要通过 ＭＹＣ２ａ／２ｂ转录因子烟碱的合成。 干旱也是影响烟碱合成的一个非生物胁迫因素。 本文结果显示干旱能够提高ＭＹＣｌａ／ｌｂ和ＭＹＣ２ａ／ ２ｂ转录因子的表达，但ＭＹＣｌａ／ｌｂ的表达增加幅度 明显大于ＭＹＣ２ａ／２ｂ的，说明干旱主要通过ＭＹＣ１ａ／ １ｂ转录因子烟碱的合成。 参考文献： ［１］Ｂｏｔｅｒ Ｍ，Ｒｕｉｚ－Ｒｉｖｅｒｏ Ｏ．Ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ＭＹＣ ｔｒａｎｓｃｉｒｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ ｐｌａｙ ａ ｋｅｙ ｒｏｌｅ ｉｎ ｊａｓｍｏｎａｔｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｏｔｈ ｉｎ ｔｏｍａ￣ａｎｄ Ａｒａ一 ６ 叩ｓ ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ，２００４，１８（１３）：１５７７—１５９１． ［２］Ｔｏｌｅｄｏ—Ｏｒｔｉｚ Ｇ，Ｈｕｑ Ｅ，Ｑｕａｉｌ Ｐ Ｈ．Ｔｈｅ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｂａｓｉｃ／ｈｅ— ｌｉｘ—ｌｏｏｐ—ｈｅｌｉｘ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｆａｍｉｌｙ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ， ２００３，１５：１７４９—１７７０． ［３］ＤｏｍｂｒｅｅＭ Ｂ，Ｘｕｅ Ｇ Ｐ．ＭＹＣ２ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ｄｉｖｅｒｓｅ ｊａｓｍｏｎａｔｅ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ， ２００７，１９：２２２５—２２４５． ［４］Ｃｈｉｎｉ Ａ，Ｆｏｎｓｅｃａ Ｓ．Ｔｈｅ ＪＡＺ ｆａｍｉｌｙ ｏｆ ｒｅｐｒｅｓｓｏｒｓ ｉｓ ｔｈｅ ｍｉｓｓｉｎｇ ｌｉｎｋ ｉｎ ｊａｓｍｏｎａｔｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ［Ｊ］．Ｎａｍｒｅ，２００７，４４８： ６６６—６７１． ［５］Ｂｉｎｇｆａｎｇ Ｘ，Ｍｉｃｈａｅｌ Ｐ Ｔ．Ｍｅｔｈｙｌ ｊａｓｍｏｎｍｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｔｏｂａｃｃｏ ｐｕｔｒｅｓｃｉｎｅ Ｎ—ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｇｅｎｅｓ ｒｅｑｕｉｒｅｓ ｂｏｔｈ Ｇ—ｂｏｘ ａｎｄ ＧＣＣ—ｍｏｔｉｆ ｅｌｅｍｅｎｔｓ［Ｊ］． Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００４，５５（５）：７４３—７６１． ［６］Ａｎｄｒｅａ Ｔ Ｔ，Ｅｎｗｕ Ｌ，Ｓａｎｄｒａ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ａ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｇｅｎｏｍｉｃｓ ｓｃｒｅｅｎ ｉｄｅｎｔｉｉｆｅｓ ｄｉｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ ｔｈａｔ ｒｅｇｕｌａｔｅ ａｌｋａ— ｌｏｉｄ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｉｎ Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ，２０１０， ６２（４）：５８９—６００． ［７］Ｋａｔｏ Ｋ，Ｓｈｏｊｉ Ｔ，Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ Ｔ．Ｔｏｂａｃｃｏ ｎｉｃｏｔｉｎｅ ｕｐｔａｋｅ ｐｅｒ－ ｍｅａｓｅ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａ ｋｅｙ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｇｅｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｎｉｃｏｔｉｎｅ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ， ２０１４，１６６（４）：２１９５－２２０４． ［８］Ｂａｌｄｗｉｎ Ｉ Ｔ．Ｔｈｅ ａｌｋａｌｏｉｄａｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｏｆ ｗｉｌｄ ｔｏｂａｃｃｏ ｔｏ ｒｅａｌ ａｎｄ ｓｉｍｕｌａｔｅｄ ｈｅｒｂｉｖｏｒｙ［Ｊ］．Ｏｅｃｏｌｏｇｉａ，１９８８，７７：３７８ —３８】． （下转第８６页） ８６ 江西农业学报 ２８卷 基酸总量比例在不同饲养方式间均没有显著差异；鲜 味氨基酸占氨基酸总量比例以测定站饲养的杜洛克 纹、肌内脂肪含量、每１００ ｇ背最长肌中鲜味氨基酸 占氨基酸总量比例以及脂肪酸中的油酸含量均显著 或极显著高于常规饲养的，因此，测定站饲养的杜洛 克猪的饲料报酬和胴体性能更高一些。 参考文献： ［１］罗鲜青，杨翠，黄丽霞，等．桂科猪肥育、屠宰性能及肉品性 状分析［Ｊ］．南方农业学报，２０１５，４６（１）：１３３—１３７． ［２］张印，郭建凤，牛月波，等．法系大约克和台系杜洛克母猪 繁殖性能比较［Ｊ］．江西农业学报，２０１５，２７（９）：ｌ１４—１１６． 猪较高。肌肉中脂肪酸组成及含量与其食用品质密 切相关。有研究表明，当饱和脂肪酸含量和单不饱和 脂肪酸含量较高时，肌肉细嫩多汁，且风味匀。不饱 和脂肪酸是肉食香味的重要前体物质，而且是人体不 可缺少的营养物质。总游离脂肪酸中饱和脂肪酸含 量主要取决于棕榈酸和硬脂酸含量，不饱和脂肪酸含 量主要取决于油酸和亚油酸含量。本试验得出，棕榈 酸和油酸含量都以测定站饲养的杜洛克猪较高，但硬 脂酸和亚油酸含量都以常规饲养的杜洛克猪较高。 总体而言，测定站饲养的杜洛克猪的饲料报酬较 高，且胴体屠宰率、胴体瘦肉率、肉色和２４ ｈ大理石 （上接第８２页） ［９］林中麟，石健林，周益．烟草打顶研究进展［Ｊ］．江西农业学 报，２００９，２１（６）：３２—３６． （责任编辑：黄荣华） ｌｏｉｄｓ ｂｙ ｈａｉｙ ｒｒｏｏｔ ｃｌｌｌｔｕｒｅｓ ｏｆ Ｄｕｂｏ￣ｉａ ｌｅｉｃｈｈａｒｄｔｉｉ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｂｙ Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｒｈｉｚｏ ｇｅｎｅｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８９，５９（８９）：１９１—２０１． ［１０］Ｅｌｌｉｌｏｔ Ｊ Ｍ．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｓｔａｇｅ ｏｆ ｔｏｐｐｉｎｇ ｌｆｕｅ—ｃｕｒｅｄ ｔｏｂａｃｃｏ ｏｎ ｃｅｒｔａｉｎ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｌｕｅ—ｆ。ｃｕｒｅｄ ｌｅａｖｅｓ ａｎｄ ｓｍｏｋｅ ｃｈａｒａｃ— ［１４］Ｒｉｅｃｈｅｍ Ｄ Ｅ，Ｔｉｍｋｏ Ｍ Ｐ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｆａｍｉｌｙ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｐｕｔｒｅｓｃｉｎｅ Ｎ—。ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｉｎ Ｎ／ｃ— ｏｔｉａｎａ ｔｏ￣ａｃｌｌＳｒｇ Ｉ ｎｅｗ ｃｌｕｅｓ ｔｏ ｔｈｅ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｏｒｉｇｉｎ ｏｆ ｃｕｈｉ— ｍｎｓｉｆｃｓ ｏｆ ｃｉｇａｍｔ￣ｓ［Ｊ］．Ｔｏｂ Ｓｃｉ，１９７５，１９：７－９． ［１１］易建华，贾志红，孙在军．打顶时间对烤烟根系形态及烟 碱含量的影响［Ｊ］．安徽农业科学，２００６（１２）：２７６２—２７７７． ［１２］Ｂｉｅｃｈｅｒｔ Ｓ，Ｂｍｄｓｃｈｅｌｍ Ｗ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｏｅｔａｄｅｃａｕｏｍ ｐａｔｈｗａｙ： ｓｉｇｎａｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｐａｔｈ ｗａｙｓ ｖａｔｅｄ ｔｏｂａｃｃｏ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，１９９９，４１：３８７—４０１． ［１５］陈发波，方平，姚启伦，等．玉米地方品种Ｇｌｂｌ基因克隆及 其遗传多样性分析［Ｊ］．南方农业学报，２０１４，４５（８）：１３４７ —１ ３５２． ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１９９５，９２：４０９９—４１０５． ［１３］Ｍａｎｏ Ｙ，Ｏｈｋａｗａ Ｈ，Ｙａｍａｄａ Ｙ．Ｐｒｏｄｕｃｉｔｏｎ ｏｆ ｔｒｏｐａｎｅ ａｌｋａ一 （责任编辑：黄荣华）
