细菌生物膜的研究进展

２００２正５　Ｇｒｉｎ　ＪＭ￣ｍｂｉｏｉＩｎｕｎ，￣ｉ．Ｍ　２ＯＯ２，ｖ０【２２．　３　综述　细菌生物膜的研究进展　李彤庄辉　在自然界、某些工业生产环境（如发酵工业和废　内外越来越多的学者从事ＢＦ研究，以期了解ＢＦ形成　承处理）以厦人和动物体内外，绝大多数细菌是附着　的分子机制、生理生化特点及其机理等，其目的　在有生命或无生命物体的表面，以生物膜（ｂｉｏｆｉｈｎ，　为控制ＢＦ的相关感染　ＢＹ）方式生长，而不是以浮游（ｐｌｍｌｋｔｏｎｉｃ）方式生长　ＢＦ是细菌在物体表面形成的高度组织化的多细胞结　构，同一菌株的ＢＦ细菌和浮游生长细菌具有不同的　特性　虽然人类第一次借助显微镜观察到的是人牙　苗斑ＢＦ’细菌，但多年来经典细菌学主要是研究浮游　生长的细菌，而忽视了对ＢＦ细菌的研究“　一　随着对细菌致病机制的深入了解，发现ＢＦ细菌　对抗生素和宿主免疫防御机制的抗性很强，从而导致　严重的临床问题，尤其是慢性和难治的感染性疾病，　因此，开始重视对ＢＦ的研究　２ｏ世纪３ｏ年代中期，　Ｇｉｂｂｏｎｓ和Ｙａｎ　Ｈｏｕｔ　等　对牙茵斑ＢＦ细菌和龋病的　关系做了大量研究，为深入了解　’细菌在健康和疾　病中的作用奠定了基础。现在已知，细菌可在人体组　织如牙齿、牙龈、皮肤、肺、尿道及其他器官的表面形　成ＢＦ，引起诸如牙周病、龋齿、慢性支气管炎、败血痛、　血栓性静脉炎、难治性肺部感染和　内膜炙等疾病　在血液、组织液和淋巴液等体蔽中一般不形成　。但　由于这些体液含有适合细菌生长的有机营养成分，因　此，当体液中含有细菌时，这些细菌可在人体内人工　医疗装置（如隐型眼镜、人工关节和　脏人工瓣膜）等　无生命物体的表面形成ＢＦ。此外，ＢＦ细菌还可污染　与人类生活相关的设拖，如空调系统、供水系统和食　品加ｘ－设备等，由此造成传染病的流行　据估计，大　约６５％人类细菌性感染是由ＢＦ细菌引起的　。　ＢＦ研究涉及微生物学、免疫学、分子生物学、材料　科学和数学等多学科，其真正作为一个学科发展　起来始于∞世纪７Ｏ年代末　９０年代后，随着相关学　科的发展及对ＢＦ钿菌在医学上重要性的认识，ＢＦ研　究得到迅速发展　：１９９０年，蒙大拿州立大学建立了世　界上第一个生物膜工程中ｍ　近几年，美国国立卫生　研究所（ＮＩｆｔ）也为此投入大量研究资金０　。目前，国　怍旨单位：ｇｌｌ￣３北京大学医学部髓生物学教研毫　通讯作者：李彤ｔＢｍｍＩ：【时ｉｉ９７＠￣ｂｊｎｍ　ｅｄｕ　）　一、细菌生物膜的特点　细菌生物膜（Ｂｙ），国内也有学者译为生物被膜，　是指附着于有生命或无生命物体表面被细菌胞外大　分子包襄的有组织的细菌群体　ＢＦ中水份含量　可高达卯％。除了水和细菌外，ＢＦ还可合有细菌分　址的大分子多聚物、吸附的营养物质和代谢产物及细　菌裂解产物等。因此，ＢＦ中存在各种主要的生物大分　子如蛋白质、多糖、ＤＮＡ、ＲＮＡ、肽聚糖、脂和磷脂等物　质。　ＢＦ多细胞结构的形成是一个动态过程，包括细　菌起始粘附、ＢＦ发展和成熟等阶段，ＢＦ细菌在各阶段　具有不同的生理生化特性。　（一）细菌粘附：细菌对宿主表面的粘附是钿茵在　宿主体内形成ＢＦ的第一步、　这种粘附作用主要是　细菌表面特定的粘附素蛋白（ａｄｈｅｓｉｎ）＂￣Ｒ￥＇】宿主表面受　体（ｒｅｃｅｐｔｏｒ）的结果，因此具有选择性和特异性　宿主　蛆织表面的蛋白、糖蛋白和糖脂常可作为受体，而选　择性地吸附特定种类的细菌　细菌粘附于表面可免　于被流体带到不利于其生长的环境，例如，生长在尿　道中的大肠杆菌具有高度进化的表面结构，牢固地附　着在尿道内，克于被尿液冲出俘外。细菌可很快发生　粘附，例如，内氏放线菌（，ｌｌｃｔｉ￣ｍｒｍ＇ｃｅｓ　ｎａｅｓｌｕｎｄｉｉ）对附着　在羟基磷灰石小球上的酸性富含脯氨酸的蛋白粘附，　约１小时吸附即趋于饱和　。在细菌粘附阶段，由于　缺乏成熟的ＢＦ结构保护，钿菌的抗・陛不强，因此，抗　菌药物的疗效相对较好。　（二）ＢＦ的发展：细菌粘附到表面后，即调整其基　因表达，在生长繁殖的同时分泌大量胞外多糖（ｅｘｏＩ￣一　ｌ￣ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＥＰＳ）　ＥＰＳ可粘结单个细菌而彤茂细菌　团块，即微菌落（ｎｆｉｃｒｏ￣ｏ＇ｌｏｎｙ）　大量微茼落使ＢＦ加　厚，因此，ＥＰＳ分子的产生对ＢＦ结构的发展十分重　要　。在此阶段，除观察到ＥＰＳ合成的增加外，也经　常观察到细菌对抗生素抗性的提高。另外，还伴有诸　如增加对紫外线的抗性、遗传交换效率、降解太分予　维普资讯 http://www.cqvip.com

＇２００２年５月第２２卷第３　－Ｊ丛　ｌ【Ⅲ　唑Ｌ　坚　Ｉ．　竺．　＋　物质的能力以及增加＝级代谢产物的产率等特性的　响其ＢＦ的形成。具体到某一菌株能否形成ＢＦ，是与　改变　这些变化是细菌为适应自然环境而采取的生　环境信号有关的。环境信号包括营养成分、温度、渗　存策略，但正是ＢＦ细菌的这些特性导致了严重的临　透压、ｐＨ、铁离子浓度和氧４Ｅｆｔ－原电位等，其中营养成　床问题。　分对ＢＦ的形成起重要作用　例如，铜绿假单胞茵和　（三）ＢＦ的成熟：成熟的ＢＦ形成高度有组织的结　荧光假单胞菌几乎可在任何可以生长的条件下形成　构，利用激光共聚焦显微镜（ｃｍｆｆｏｃａｌ　ｓｃａｎｎｉｎｇ　ｌａｓｅｒ　ｒｒｉｆ—　ＢＦ，大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｚ＇ｈｉａ　ｃｖｔｉ）Ｋ一１２和霍乱弧菌（Ｈｈ　，　ｃｍｓｃｏｐ￣，ＣＳＬＭ）观察到成熟ＢＦ结构是不均匀的，即具　ｃｈｏｌｅｒａｅ）的一些菌株在基础培养基备件下不能形成　有不均质性（ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｂ，），它是由类似蘑菇形状的微　ＢＦ，但是，大肠杆菌Ｏ５１７：Ｈ７只在低营养培养基条件　菌落组成的，在这些微菌落之间围绕着输水通道，可　下形成ＢＦ。如菌株是由表面分离的，一般该菌株具有　以运送养料、酶、代谢产物和排出废物等　因此，有　人将成熟的ＢＦ内部结构比喻为原始的循环系统　当　细菌在增殖时可因菌种、营养、附着的表面和环境条　件不同，形成疏松或致密以及厚薄不等的ＢＦ结构。　在ＢＦ成熟过程中，除了与上述ＥＰＳ的产生有关　外，细菌的密度感应系统（ｑｕｏｒｕｍ　１　ｓｙｓｔｅｍ）起重　要作用：１ｏ／　例如，铜绿假单胞菌（阢　幽　ａｅｒｕ￣ｉ一　￣１ｏ８ａ）的密度感应系统突变株，与野生菌株相比，其形　成的ＢＦ较薄，缺少复杂的结构，且抗性较差　细菌密　度感应系统是细菌通过监刹其群体的细胞密度来调　节其特定的基因表达，以保证ＢＦ中营养物质的运输　和废物的排出，避免细菌过度生长而造成空间和营养　物质缺乏．．革兰阴性细菌的密度感应系统走多是利　用、一酰基高丝氨酸内酯（Ｎ—ａｃｖｌ　ｈｏ￣ｒｉｎｅ　ｌａｃｔｏｎｅｓ，　ＡＨＬ）作为信号分子，Ａ｝１】＿浓度随细菌密度的增加而上　升，当ＡＨＬ达到一个闽值时，可与一种转录激活子鲒　台而激活，ＡＨＬ和转录激活子复合物进一步诱导靶基　因的表达　。。　成熟的ＢＦ在内在的调节机制或在外部　中刷力等作用下可部分脱落，脱落的细菌叉转变成浮　游生长状态，可再粘附到合适的表面形成新的ＢＦ　由于ＢＦ的形成是一个动态过程，且结构上存在　不均质性，因此，ＢＦ中的细茵是在不同时间和空间发　展的，其基因表达和生理活性也具有不均质性　ＢＦ垂　直方向不同层面的细菌ＲＮＡ含量、呼吸活性和蛋白质　合成均不同。同时由于细菌所处微环境的ｐＨ和氧化　还原电位等不同，可使遗传学上一致的细菌个体表现　不同的特性，如产生毒素不同可使ＢＦ中一些细菌个　体对宿主无危害，而另一些细菌则可能对宿主有致命　威胁　。因此，不均质性是细菌ＢＦ的另一个重要特　性，也与细菌的抗性有关　从理论上讲，ＢＦ是细菌在表面生活时采取的生　长方式，这是细菌的一种本能，任何细菌均可形成ＢＦ。　但是，当细菌发生遗传改变时，可影响其形成ＢＦ的能　力，并有可能影响其致病性　有些细菌的毒力因子　（如茵毛等）与形成ＢＦ能力有关，则其毒力强弱可影　形成ＢＦ的能力。不是由表面分离的菌株，可用微量　反应板方法测定其形成ＢＦ的能力，其基本步骤是在　微量反应板的孔中培养细菌，形成的ＢＦ将贴附于孔　壁，洗掉浮游细菌后，用结晶紫染色法观察是否形成　ＢＦ．．　ＢＦ可由纯茵种形成，也可由多菌种组成：在多　茵种ＢＦ中，不同菌种在不同的时问和空间发展．存在　着菌种的交替演变。牙菌斑是典型的多菌种Ｂ　，　革兰阳性链球菌（　，　ｆＤ∞　）和放线菌是牙茵斑ＢＦ　中早期定植菌种，它们的粘附生长为后继定植菌种的　粘附创造了新的粘附表面受体，例如，梭杆菌（Ｆｏｚｏ—　ｂａｃｔｅｒ／ｔｍＯ可通过共凝集作用（ｅｏａｇｇｒｅｆｆａｔｉｏｎ）粘附到链　球菌和放线茵上面。另外，链球菌和放线茵的代谢造　成局部微环境改变（氧化还原电位和ｐＨ等）也为新菌　种的演变创造了条件，倒如，一些兼性厌氧茵的生长　消耗氧气，从而创造了厌氧微环境，使绝对厌氧梭杆　菌有可能在口腔这一开放环境中得以定植生存．．因　此，多菌种ＢＦ扩走了细菌的生存环境　二、生物膜细菌致病的机制　（一）抗生素抗性：与浮游细菌相比，ＢＦ细茵对抗　生素的抗性可提高１０～１　０［ｘ）倍。ＢＦ细菌抗药性主要　取决于其多细胞结构“　。　：（１）ＢＦ中的ＥＰＳ起屏障作　用，抗生素分子向细菌细胞运输。多糖蛋白复合　物还可与一些药物反应，具有中和药物的活性；（２）ＢＦ　中微环境的不同可影响抗生素的活性，如局部酸性代　谢产物的积累对许多抗生素活性有拮抗作用，厌氧微　环境可严重影响氨基糖苷类抗生素的活性等　此外，　营养的消耗或抑制性代谢产物的积累可使一些细菌　生长壤慢或停止，这类细菌一般对抗生素敏感性　差。因此，ＢＦ结构的不均质性和ＢＦ细菌生理上的不　均质性使渗入的药物只能杀死一部分细菌，而另一部　分细菌则存活下来；（３）表面生长可诱导细菌表达与浮　游细菌不同的基因，诱导产生ＢＦ特异性表型　ｌ硎如　ＢＦ中的一部分细菌可进入一种类似芽孢茵的分化状　态，其对抗生素有高度抗性；（４）多菌种ＢＦ中各菌种　维普资讯 http://www.cqvip.com

－［］堡邀生塑堂　鱼堕堂盘查　Ｑ　生　旦蔓丝鲞笠　Ｊ　ｃ　“　～１０ｌ＿Ｍ　呲，ｖ口ｌ　２２．、ｌ】３　的协同作用。侧如，产生Ｂ＿内酰胺酶的菌种可保护不　性地抑制病原茵的粘附、定植和在生物膜中的代谢，　产生此酶的菌种免受青霉素的作用。　克服由于传统抗生素的使用所引起的正常菌群失调、　（＝）对抗机体免疫防御：ＢＦ细菌可利用多种方　真菌：次感染和抗生素抗性等问题　。目前，国内外　式对抗机体免疫防御机制　：（Ｉ）减少细胞因子（ｃｖ　开发的微生态制剂主要有三娄：印益生菌（ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ　ｓ），　Ｉｏｋｉｎｅ）的产生或酶解细胞因子。例如，表皮葡萄球菌　如双歧杆菌和乳酸杆菌等；益生元（ｐｒｅｂｉ０ｔｉｃｓ），如双歧　（Ｓｔａｌｔｆｙｔｏｃｏ￣ｃｕｓ　ｅｐｉｄｅ￣）浮游细胞刺激人血淋巴细　因子和各种寡聚糖等；各生元（ｓｙｎｂｉ￣ｉｃｓ），即益生茵和　胞产生的７干扰素量是ＢＦ细胞的８～１６倍；（２）抵抗　益生元同时并用的生态制剂　单核巨噬细胞的吞噬作用；（３）ＢＦ产生的粘液多糖可　（三）发展抗细菌粘附的生物材料，预防ＢＦ污染　抑制中性粒细胞的趋化作用；（４）ＢＦ细菌可刺激机体　各种临床应用的导管、插管和医用合成材料　表层镀　产生抗体，但这些抗体不仅难以杀灭ＢＦ内部的细菌．　而且可在ＢＦ表面彤成免疫复合物，损伤周围的机体　组织；（５）ＢＦ诱导的补体转化和中性粒细胞呼吸明显　下降　、　值得指出的是，一种ＢＦ抗药或抗机体免疫防御　的机制不是单一的，往往有多个机制共同起作用。另　外，不同菌种的抗性机制也不尽相同　三、生物膜相关感染的控制　常用抗生素疗法对细菌ＢＩ＂引起的感染疗效欠　佳随着细菌耐药因子的传播，传统抗生素的疗效更　为有限。在这种情况下，细菌ＢＦ的研究为抗细菌性　感染特剐是难冶性慢性感染提供了崭新的途径　（一）从细菌ＢＦ中鉴定新的抗生素物质，发展新　型抗生素类药物　新药的设计目标是破坏ＢＦ的形　成，因此，凡是与ＢＦ的动态变化和结构形成有是的分　子转化、代谢活性和信号传导过程，均可作为新药研　制的目标　１９９９年Ｎ，ｔｍｅｅｖ，ｉｎｄ研究组　在革兰阳　性菌金黄色葡萄球菌（ｓ　ｎｍ　）中发现了一种转肽酶　（ｓｏｒｔａｓｅ），它与表面蛋白的分泌定位有关。该酶缺陷　株不能正常表选表面蛋白，从而大大减弱诱变株对宿　主的粘附性和致病性。转肽酶基因几乎存在于所有　革兰阳性细菌中　Ｊ．因此，它是一种很有价值的新药　目标，能抑制转肽酶形成的药物预计能有效预防革兰　阳性细菌引起的感染　ＥＰＳ和细菌密度感应系统等均　可作为筛选新药的目标，新药可干扰ＥＰＳ＂和：ｄｆＬ信号　的台成，或降解已形成的ＥＰＳ和：ｄ４Ｌ。其特点是不杀　死细菌．而只是破坏细菌在宿主体内的粘附、定植和　形成保护挂的ＢＦ，这样细菌发展抗药性的环境压力较　弱，因此不易产生抗药挂。　（＝）研究人体健康微生物ＢＦ的组成及其与宿　主和睦相处的分子机制，发展新型抗感染微生态制　荆　值得指出的是，并非所有ＢＦ都是有害的，人体带　有大量正常微生物，与人类健康息息相关。新型抗感　染微生态制剂将着眼于增进有益的正常微生物ＢＦ活　性，通过竞争营养、空间和产生微生物拮抗物质，特异　银的合成材料可预防ＢＦ污染　脏人Ｉ瓣膜和导尿菅　等　。　；表面镀铁的人工声带可防止假丝酵母（Ｃａｎｄ，￣．　幽）污染　Ｊ　（四）对现已应用的抗生素，研究其尚未被发现的　抗ＢＦ特性和新药的治疗方案。据报道，联合使用抗　生素效果良好。Ｙｍｔ￣ｓａｋｉ等　发现罗红霉素和亚胺　硫霉素合用能有效杀灭金黄色葡萄球菌ＢＦ，其机制与　增强多形核白细胞和巨噬细胞对ＢＦ的渗透有关。罗　红霉素和氟罗沙星对铜绿假单胞茵ＢＦ有明显抑制作　用，两者台用可治疗由铜绿假单胞茵ＢＦ引起的难治　性感染，其中罗红霉素通过抑制细菌多糖蛋白复合物　夸成来增强氟罗沙星对ＢＦ的渗连，对氟罗沙星杀灭　ＢＦ中细菌起增效作用　目前应用的抗生素主要是　通过测定其杀菌或抑茵活性筛选获得的，但有必要应　用新的筛选标准，如抗细菌粘附等，重新判定已知抗　生素的抗ＢＦ活性　总之，ＢＦ的研究使微生物学的发展迈出了重要　一步，即认识到微生物可以以多细胞的生命形式存　在，具有比以往所理解的更为复杂的生命活动　同　时，这一领域的研究将大大丰富人类控制细菌性感染　的手段　当前，各种先进的生物技术被用于ＢＦ的研　究，倒如，利用敏光共聚焦显微镜和原子力显微镜研　究ＢＦ的结构和动态变化；利用报告基因和荧光探针　了解ＢＦ中的基因表达；利用基因芯片和双向电泳技　术比较ＢＦ细菌和浮游细菌基因表达和蛋白组成的区　别等　可以预见，随着ＢＦ研究的深入，人类将能更好　地控制细菌性感染　参考文献　ｌ　Ｇ￣ｔｅｃｔｅｔｌ　ＪＷ　Ｌ　ａｒＩｄ　ｗ出Ｚ　Ｃａｈｌｗｅｌｌ　ＤＥ，ｅｌ　ａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｕｌｕ｝ｋ　Ｍ￡（加ｂ“　１９９５　４９　７　Ｊｌ一７４５　２　Ｃｏｓｔｅｒｌ￣ｎ　ＪＷ　ＩｎｔｒｏｄｕｔａＪｍ￣　ｂ［Ｏｌｒ￣ｈ３ｔ　Ｉｎ／Ｊ　Ａｎｔｉｔｓｉｃ￣ｉ）ａ．ｇｅｓｔｔｓ、１９９９　Ｉｌ：　２１７－２２ｌ　３　‰Ｊ州咖ＪＷ　￣＇ａｒｔ　ＰＳ．（　口Ｒ　ｔ船　ｂｉｏｆｉｌ￣ｍ：…　ｃ叫ｓｅ　ｏｆ　ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ　ｉｎｌ￣＇．１　Ｌ咖　“　ｔ９９９．２８４　１３１８－１３２２　４　Ｐｄ　ａ　Ｃ．Ｆｔ　ｎｇ　ａ　ｌｉｎｋ　ｂｅ　ｔ瑚ｂｉｏｆｌ／ｎ￣ａｎｄ血…　Ｓ　，　，　维普资讯 http://www.cqvip.com

２加０年５月第２２毒第３　Ｍｉｃ￣ｂｉｏｌ　ｌｎｍ￣ｔｕｄ　Ｍａｙ　２００２．Ｖｏｌ　２２　Ｎｏ３　．甥３：Ｉ８３７一博３９　５　ａ１ｊｎⅡｄ　Ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｂｉｏｆｆｈｍ　ａ上Ｊｄ　ｌ　ｘ　０墙一ｓｌｉ口ｄ　ｅ　Ｎａｔｕｒｅ，２㈣．　１７　ｓ｝ＩＬ　ＡＬ，Ｗｕ　ＣＩ＇ｈｉｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｔ／￣ｔ　ｏｆ岛神，幻　甲　讹　ｄｉｍｅ．恤ｔｈｅ　ｐＩＩ　ｎ…　一　ｐｅｒｌｔ￣ｅａｌ　ｌ】Ⅲ凹０ｐ｝Ｉ　目　ｉｓ　ｉｎｌｅｒｆｅ￣ｊ　ｉｎ　４∞：２　一２８６＋　６　ｓｕ山ｄａⅡｄｌＷ　１ｋ　ｈｋ￣ｄｍｍａｔｒｉｘ…ｎⅥ…ｔ．Ｔｒｅｎｄｓ　Ｍｉｅ　）ＪｏＩ．删ｊ￣．９：　ｂｉｌｉｚｅｄ　ｂｕｔ（Ｉｖｏｚｒｒｉｆｃｍｉｃｒｏｂｉａｌ　∞　ｋｄ　ｄｅｐ　ｕ１即Ｉ　Ｍｉｃｌ￣ｂｉｏｌ　ｈ￣ｎｍｏ１　１９９８．４２：３３－￣０　Ｉ８　Ｃｏｓｌｅ￣ｌ　ＪＷ，Ｓｔｅ嘲　ＰＳ　Ｂａｔｔｌｉｅｔｇ　ｂｉｏｆｉｌｒ￣ＳＯ　Ａｍ，２００１　２５８：７￣Ｆ８［　１９　Ｍ￣ｎｍｆｉａｎ　ＳＫ，［ａｕ　Ｇ．Ｊ—Ｅｌｌ，ｎ　Ｒ呐　∞…ｓ０ｎａ　７　Ｖｉｎｌａｙ　ＢＢ．１＋ａ！ｋｑ￣Ｓ．［抽ｌ嘲】山ｅｒⅡ　ｉｎ　ｍｉｃｒ￣ｉａｌ　ｐａｔｈｏｇｅ￣ｉｅｉｔｙ　…Ｍ１ｃ￣－ｂｉ　Ｍ　Ｂｉｏｌ　Ｒ　１９９７．６】：Ｉ３６＿Ｉ６９　Ⅱ１　呲ｓ　ｄｅｆｅｃｔｉ￣ｉｎｔｈｅ　ｄｉｓｇｌａｙ　ｆ￣ｏｍｌｍａｌ　ｔ—Ｉ　Ｎａｉｌ＾　ｕｆａ　口删…Ｓｃｉ　ＬＩＳＡ．２　Ｉｉｎｆｉｒｅ　ｐａｔｈｏｇｅ￣ｉｓ　９７：５５［０－５５１５　８ⅡＴ．Ｊｅｈａｎｓ￣ｃＪＩ．Ｆｌａｙ１３，ｅｔ　ａｉ　Ｓｌｒａｍｓ　ｏｆ　ｃ“ｎ　ｆⅣ……ｅ￣，ｌｕｎｄｌ　ａｎｄ　Ａｃ．　∞　曲Ｍ，Ｉ—Ａ，？ｍｌｒ￣ａｉｏ　Ｍ．ｅｔ　ａｌ　Ａｎ目ｌ　Ｈ口　ｓⅡｎ嘲ｔ　ｏｆ　ｓｃｃｌａｓｅｓ—　ｈＪｂｌｌ　ｓｂｕｄＬＬｒａＩ　ｖａｒｉ￣Ｊｔ　Ｉ　ｔＪｎｌａｉ　ｓｒｄ＊ｍｉｔ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ａｎｄ　ｎｄⅪ　ｏｆ日ｄ　ｕ椭　ｌｒｍ＆Ｍｉｃｎｉ￣ｉｏ１．２００１．９：９７－１０１　ｌ【　ｐｍｈｉｏｌｋ￣，ａｎｄ　ｓｙｘｒｂｉｏｔｋ￣：ａｐｐｎ￣：ｈ　ｂｉｔｔｄ　ｔｏ・ｌ　一ｔ　ｐ％￣ｉｄｅ　ｎ￣ｉｆｓ　ｉｎ　ｓａｌｉｖａＯ．ｐｍ“一６７：２∞３　２　［ｎｆｅｃｌ　ｌ—ｍ，１９９９．　２１　ＧｄｌＪｎｓ帅，Ｇｉｂｓｏｎ　ＧＲ　ｌ　ｈ　ｒ　ｍ　ｔｈｅｍｉｃｒｏｂｉａｌ￣ｘｘｔｌｏｂｇ＇　ｔｈｅ　ｇｕｔ　Ａｒｕ　Ｊ　Ｃｉｉｎ　Ｎｕｔｒ，［９９９．　９￣＇ｍｒｐｅｎｎ＇ｒ　Ｊ，Ｍａｎｚ　．Ｓ　＾Ｕ　ＩＩｅｔｅｍｇｔ￣ｎｅｉｔ３．ｉｎ　ｂｋ￣ｔｈｔＬｓ　ＦＥＭＳ　Ｍｉ，　＆６９：１０５２Ｓ－１０５７Ｓ　Ｌｉｅｃ￣ｅｒｇＨ．ＬｕｔｒｄｅｂｅｒｇＴ　Ｓｉｌｖｅ￣，￣ａａｉｎｇｏｆｍ－ｍａｎ．ｒ：ａｔｈｅｔ￣ｈｅｒ３５８．　ｅ　ａｎｄ　ｆ，　ｏ—　ｃｒａｂｉｄ　Ｒｅｖ．２㈣．Ｂ４：６６１—６１１　ｍ　ａｄ—　１０　Ｉ　Ｋｉ￣ｉｌ　ＴＲ．１ｇ）ｅ￣．－ｋｉ　ＢＨ　ｅＬ吐ｍ～ｌ１　ｋｄｅｎｌ￣…￣ｓｉｎｇ，　ｎｅ　ｅ：ｑ３ｉｅｓ￣ｉｍ．ａｎｄ　ｔ　　Ｕｍｌ　Ｒｅｓ，１９８９，１７　３５７—　ｂｉ　ｋｍ　Ｍ　ｈ　ｋ　ｚｕ　ｌｅｒ　ＰＥ　Ｏｎｄ　ｎｕｃ￣９ｏｉｄ…３Ｌ０：ｔ１７　Ｉ２８　ｂｉｏＦｄｍ￣．Ｊｎ１　ｌ　０ｎｓ．ａｉｄ　∞Ｋｌｕｅｈ　Ｕ，Ｗ　ｅｒＶ，Ｋｅｌｌｙ　Ｓ．ｅｌ　．Ｅｔｉｃｆ￣：ｙ　ｏｆ　ｓｉｈ．￣一ｅｘｈａｌｅｄｆａｂｒｉｃｔｏ　ｐｍ　ｖ帆ｔ　ｂａａｅｌｉ　ｃｏｌ０咖　…Ｂｉ咖　Ｍ　ｎ】　＊；　ｅｍ　ｄｅｖｆｃ￣ｂａｓｅｄ　ｂｉｏｆｆｌｎｌ　ｆ　ｎＬ　ｌ・　Ｊ　ｇｅｎｅｌｉｃ　ｓｙｓｌｅ￣１２　ＭａｈＴＨ　Ｏ’　ａＪｌｎｕ　Ｒｅｖ　Ｍｈ：ｒ，ｉｆｉｏ１．￣ＡＩ３０．５４：４ｌ３＿４”　ｅ　ＧＡⅥ　ｈ血　ｏｆｂｉｏｆｉｌｍ　Ｉａｍ　“＇￣ｌｌｍｌｃｒｏｂｉａｌ　Ｒ　．３ｌＩＩ）．５３：６２ｌ一６３Ｉ　ｍ　叫ｃｏａｔｉｎｇｉｒａ－　Ａｃｔａ　Ｏ　＿Ⅲ　，２∞ｔ，　叫ｓ　Ｔｒ￣ｄｓ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏ［，２００ｌ，９：斗珀　２４　Ａｒ　Ｊｋ　Ｈ刚　ｋ　Ｄ，Ｓ，ｍｄｅ￣Ａ，Ｈｅｌｄ　Ｍ．ｅｔ　ｐｍｖｅ　，ｌｕ￣ａｂｉｌｉｔｙ　ｓｉｈ￣ｅⅧ。ｅ　ｐ瑚山ｅ　１３　Ｓｔｅｗａ￣ｌ　Ｐｓ，Ｃｏｓｔｅ￣ｏｎ　Ｊｗ　Ａｎｔｍｉｎｔｉｅ…Ｌ址　１　２∞１．３５８：ｌ３５一ｌ３８　Ｉ４　Ｐｅｄｅ￣ｌ　ＳＳ．Ｌｕ　Ｌｒｌｋ　…ｎｍ轷ｎ璐。ｉｎ　ｃｙｓｔｌｅ　…　１．＝　ｏｆｌ￣－ｌｏ４ａ　ＪＪ　ｂｉｌｏｆｄｒ￣　１２１：６４３—６４６　　ａｌｇｉｒｉａｈ－－ｐｒｃｄｕｃｌｎｇ，ｌ￣ｏｃｉｄ　ＲｅＬｄ　…删Ｉｓ　ｓｕｐ　－ｔ９ｑ２．２８：１＝７９　　２５　Ｙａｍａａａｋｉ　Ｏ，Ａｋｉｙ￣Ｔｍｐ嗍…Ｈ，。ｒ邝Ｙ，　。ｍ　＾・　ＩｎＩⅪｎｌ山ｌ—Ｉ　ｆ　ｍｘｉｏｔｈｒｔｔｎｙｃｉｎ　ｂ∞　Ｉ蕾南ｍ矗ｈ　Ｓ　ａｎｔ　１５　ｌＹａ￣）ｐｔａＭＫ．　Ａｍ‰Ｊｍ　ｃａｕｓｅ￣ｄ　一８８２　ｌ　ｐｎＭｕＯａ￣ｏｆｉｎｌｅｆｆｅ￣一ｇ￣ｍａｒｎａ　Ｊ　１　…Ⅲ　Ｊ　Ａｔｒｍ￣ｉｆｃｍｂ　０】ｍⅢｌ　，２∞Ｉ，４８：５７３－５７７　，Ｉ￣ｅｐｈｒｏ１．１９９６．７：研２６陬ｉ千，　害，方向群，等罗虹毒素与氟罗沙星联合应用对铜绿但　单胞苗被膜的影响中牛医学杂志，［９９９，７９：７５７－７６０　１６　Ｈｅｒｄ￣ｘ　Ｊ，　Ｐｏ，ｐｈ３．￣　Ｓ　Ｐ∞ｋ　Ｓ，ｅｌ　ａ１．Ｃｘ￣ｏｋｉｎｅ　ｄｅ．ｇｔａｃｈｔｉｃｃｌ　ｂ　ｂｉｏｆｉｌ￣ｏｆ　’ｎｍ　ＣｌＪ丌Ｍｉｃｍｂｉｏｌ，１　．３６：２１６－２１９　（收稿日期：２０９１一ｔ１＝０５、　《中华微生物学和免疫学杂志》２００２年征订启事　《中华微生物学和免疫学杂志》为中华医学会主办　１９８１年创刊，主要报道医学微生物学和免疫学方面的研究论文、　简报、评论、综述、　内外学术动态、书评及消息等　本刊辟有：细菌学　病毒学，舟子微生物学、临床微生物学、疫苗学、感染免疫、基础免疫学、临床免疫学、分子免疫学、　免疫遗传学、肿瘤免疫学、中药与免疫、免疫学技术、榆测技术等栏目：　本刊为基础医学、牛物学两学科的核心期刊，是中国科学引文数据库、中国学术期刊练台评价数据、中国医学生物学　文献数据（英文版ｊ、中国学术期刊文摘、中国医学文摘等的来源期刊　被美国化学文摘（ｃＡ）、生物学文摘（ＢＡ）、荷兰医　学文摘（ＥＭ）、Ｍ￣＊ｌｆｉｎｅ等　外著名检索期刊收录。进人围家新闻出版署建设的　中国期刊方阵～。　读者对象：医学微生物学和免疫学专业的科研人员、教师及有关的中、高级卫生、防疫、检验工作者　本刊为烈月刊，大１６』１：本，每期９６页，每册定价１Ｉ　ＩＩ】元．于每年１１月开始收订，国内由全国备地邮电局发干ｊ。国　外由中国国际图书贸易公司（中国国际书店）发行。如错过邮局征订，亦可直接向编辑部订购（款从邮局寄本刊编辑部，　由Ｓ政编码：１００（Ｅ４，电话　叭０＿６５７５６５９５　Ｅ－ｔｒ￣ａｉｌ：ｃｊｔｍｂ＠ｐｕｂｌｉｃ．ｂｔａ．ｎｅｔ．ｃｎ）。　邮发代号＇２—５５国外刊号：ＢＭＳｆ７