分子量的测定
1、流动相的准备
使用色谱纯级甲苯,甲苯经0.45um滤膜过滤后,超声脱气15min,恢复到室温后方可使用。 2、开机及平衡过程
(1)打开空调,使室内温度保持在25℃左右。
(2)打开电脑及仪器(包括输液泵LC-20AD、检测器RID-10A、柱温箱CTO-20A)。
(3)运行LCsolution。
(4)点击“Instrument Parameters View”中“Normal”,设定方法参数。 仪器参数窗口设定方法参数:
流动相流速(pump a flow):1ml/min
测定时间(time):大于溶剂峰出峰时间2-3min 柱温(oven temperature):40℃(与检测器温度相同)
选中Advanced窗口,pump,pressure:max:8mPa(参照柱子说明书,两根柱子串联则相加)
点击Download按钮,出现对话框选择是,将参数下载到仪器。
提示:“Instrument Parameters View”中“Advanced”为各设备的运行参数,参考相关说明书制定。
注意:将排气泡管和排废液管插在
(5)输液泵排气:逆时针拧开LC-20AD排液阀,按purge按钮,3min后自动结束,顺时针拧紧排气阀。
提示:排液阀拧开不要超过180度,否则反而容易在purge时引入气泡。
(6)平衡GPC柱:待2.1.5结束后,按(Instrument On/Off)使仪器按照方法参数开始运转,一般1小时左右基线可以走平。
(7)示差检测器平衡
(8)按R flow on/off键冲洗参比池。
(9)10min后,按R flow on/off键停止冲洗,10min后再次冲洗,反复冲洗
2-3次以消除池内气泡。
(10)调零,等基线平稳后检查balance值,如果大于50,就进行光路平衡,如果小于50,不必进行。
(11)在仪器监视窗口查看检测器能量应处于6000和9000之间,否则在面板上调节电压使之坐落在该范围内。
(12)待基线基本稳定,按Zeros Detector A键调零。
3、分析操作过程
手动进样器点击采集single start进行单次运行,仪器就绪后,进样体积20ul,取22ul样品(要求不能有气泡)进样,多余样品会自动从旁边小瓶流出,仪器开始进行样品分析。 4、分析完冲洗及关机过程 (1)第二天将会再次使用
a.使流动相以0.2mL/min流速流入填充柱,点击下载,点确定,保存。 (2)仪器长时间不用
a.点击仪器控制栏图标,停止温控。
b.使流动相以0.2mL/min流速流入填充柱,直至柱温冷却至室温; c.点击“intrument on/off”
d.依次关闭程序、电脑和仪器。
提示:柱子的使用和保藏应该按照柱子使用说明书来操作。更换溶剂时注意缓冲盐不要析出和溶剂之间的互溶性。