六味地黄方不同剂型中多糖含量的比较研究

·实验研究·117

六味地黄方不同剂型中多糖含量的比较研究

吴伯姝

（天津市北辰区普东街社区卫生服务中心，天津 300402）

【摘要】目的 研究分析六味地黄方不同剂型中多糖含量。方法 自制六味地黄浓缩丸、六味地黄片、六味地黄蜜丸、六味地黄汤剂、六味地黄胶囊做供试品，以分析纯无水葡萄糖做标准对照品，采用苯酚-硫酸法测定其活性多糖含量，对比分析结果。结果 当葡萄糖含量在60.10～180.30 µg时，与吸光度有较好的线性关系。在此范围内，六味地黄方不同剂型的多糖含量差异较大，其中大蜜丸和片剂含量较高，汤剂较低。结论 六味地黄方不同剂型中多糖含量具有一定的差异。

【关键词】苯酚-硫酸法；六味地黄方；不同剂型；活性多糖

六味地黄丸最初在《小儿药证直诀》中出现，

在临床上常用来补肾滋阴。现代药学通过实验证明，其有显著的抗衰老、抗缺氧、抗疲劳、增强人体免疫力疗效，同时还可以降血脂血压、改善肾功能代谢，在临床治疗方面使用普遍[1]。六味是指熟地黄、山茱萸、泽泻、牡丹皮、山药、茯苓，每一味均含有多糖成分，而六味地黄方中起调节免疫功效的正是活性多糖[2]。因此，本文对六味地黄方的不同剂型中多糖含量进行测定，分析测定结果。1 仪器与试药

1.1 仪器

AUW 220D型电子分析天平；UV-2550 紫外分光光度计

前两者均由日本岛津公司出产）；0406-1离心机（上海手术器

械厂）；HHS型电热恒温水浴锅（上海实业有限公司医疗设备厂）。

1.2 试剂

六味地黄浓缩丸、片剂、蜜丸、汤剂、胶囊（自制）；无水葡萄糖标准品（分析纯）；苯酚（分析纯）；熟地黄、熟地黄、山茱萸、泽泻、牡丹皮、山药、茯苓中药材（樟树中药饮片厂）。2 方法

2.1 六味地黄方不同剂型制备按照《中国药典》的标准[3]，将六味中药材制成六味地黄浓缩丸、片剂、蜜丸、汤剂、胶囊。六味地黄汤按比例制成0.03 g/mL浓度。

2.2 标准品与供试品溶液制备2.2.1 标准品制备

精密称取无水葡萄糖60.10 mg，并置于100 mL的容量瓶中，加水溶解，定容至刻度，得标准品溶液0.601 mg/mL。

2.2.2 供试品制备

精密称取六味地黄浓缩丸、片剂、蜜丸、胶囊各3.0 g，置于具塞瓶中，溶解，加蒸馏水定容至100 mL，过滤，吸取续滤液。这些续滤液与自制汤剂1 mL同置于具塞刻度试管（10 mL）中，加4 mL无水乙醇离心10 min，转速4 000 r/min。取沉淀，加乙

醇水溶液（80%）

洗2～3次，定容至100 mL，摇匀即可[4]

。2.3 标准曲线绘制

精密量取对照品溶液1.0，3.0，5.0，8.0，10.0，12.0，15.0 mL，置于容量瓶（50 mL）中，定容。再取上述溶液各20 mL置于10 mL的具塞刻度试管中，均加入1.0 mL的苯酚溶液（15%），摇匀后，快速加入浓硫酸溶液5.0 mL，静置10 min。再在沸水浴中加热10 min，取出，冷却至室温。空白对照取20 mL的蒸馏水，同上，平行操作。在490 nm波长下测定含量。得线性回归方程为A（吸收度）＝13.472C（浓度）＋0.030 8， r＝0.999 5，当葡萄糖含量在60.10～180.30 µg时，与吸光度有较好的线性关系。

2.4 稳定性实验

表1：六味地黄方中不同剂型的多糖含量测定

剂型浓缩丸大蜜丸胶囊片剂汤剂多糖含量（%）

6.56

12.17

3.68

12.39

4.04

精密量取对照品溶液，采用苯酚-硫酸法测定，每10 min1

次，测12次，经计算，RSD＝0.88%，n＝12，

由此可得，在2 h内吸收度稳定。

2.5 精密度实验

精密量取自制汤剂溶液1份，采用苯酚-硫酸法测定，共测

6次，经计算，可得RSD＝0.30%，

n＝6。2.6 重复性实验

精密量取自制汤剂溶液5份，采用苯酚-硫酸法测定，经计算，RSD＝3.87%，多糖含量平均为6.68%。

2.7 加样回收率实验精密量取6份含量已知（2.02%）的自制汤剂溶液1.0 mL，加入6.40 µg标准品溶液，采用苯酚-硫酸法测定，经计算，RSD

＝2.12%，

n＝6，平均回收率为99.45%。2.8样品含量测定

精密量取各供试品与对照品溶液与蒸馏水20 mL，采用苯酚-硫酸法测定多糖含量，以葡萄糖量计算。3 结果

通过采用苯酚-硫酸法测定多糖含量，六味地黄方中不同剂型的多糖含量各有不同，含量范围为3.68%～12.39%。大蜜丸和片剂含量较高，胶囊和汤剂较低，五种剂型差异较大。4 讨论

现代医学中，六味地黄方的滋阴补肾功效已非常明确。通过长期探索，得出其增强免疫的功效主要因为六味药中的活性

多糖。鉴于六味地黄方的多种剂型，

探索出含量最高的剂型对临床用药能够提供重要依据[5]

。本文采用苯酚-硫酸法测定活性多糖。此方法较为经典，但影响因素亦较多，因此在测定过程中，可对其用量、显色温度、显色时间等做考察，得出最佳测定条

件再进行含量测定[6]。由表1可得，

大蜜丸和片剂含量较高，胶囊和汤剂较低，五种剂型差异较大。据查阅的文献，市售品含量测量结果与本文中自制样品结果相似。各厂家原药材工艺参数控制不同、各剂型中各药材处理工艺不同等因素都可能造成含量差异。对差异原因，可做进一步探究。参考文献

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（118

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近红外光谱建立快速测定中成药硬胶囊水分的方法研究

刘译

（怀化市食品药品检验所，湖南怀化 418000）

【摘要】目的 分析近红外光谱方法对中成药硬胶囊中水分的测定效果。方法 以80份中成药硬胶囊作为样品，将其随机分为4组，分别用烘干法、甲苯法、减压干燥法及近红外光谱方法测定其水分，进而比较4种方法的测定结果。结果 4种方法的水分测定结果无明显差异，其中近红外光谱方法的测定时间短于其他3种方法。结论 近红外光谱方法具有易操作、省时、对测定样品的损失小等优点，因此对于中成药硬胶囊水分的快速测定具有重要意义，值得广泛应用于中成药硬胶囊水分的快速初筛。【关键词】红外光谱；快速测定；中成药硬胶囊

据相关统计结果显示，中成药硬胶囊中水分含量的不合格

燥法及近红外光谱方法测定后结果。具体见表1。

率呈现逐年上升的趋势，水分含量偏高是导致药品发霉变质的

从上表结果中得出，4种方法的水分测定结果差异无统计主要原因[1]

，因此中成药硬胶囊水分测定在中成药质量控制中具学意义，其中近红外光谱方法的测定时间低于其他3种方法，结有重要作用。传统中成药硬胶囊水分测定方法包括烘干法、甲果差异具有统计学意义，此数据显示了近红外光谱方法测定中苯法及减压干燥法，由于以上方法耗时较长，目前很少使用。随成药硬胶囊样品水平的高效率性。着科研的不断进步和发展，近红外光谱方法逐渐被应用于中成3 讨论

药硬胶囊的水分测定中，该方法具有简便、准确、灵敏等优点[2]。中成药硬胶囊若含有过量的水分，则会促使药物发霉或变笔者比较了四种水分测定方法的测定效果，具体如下。质，因此如何快速、准确检测出中成药硬胶囊中的水分受到了越1 资料与方法

来越多的关注。近红外光是一种介于可见光和中红外之间的电1.1一般资料

磁辐射波，具有较高的定量准确度。红外光谱区与有机分子中本研究中的80份中成药硬胶囊样品来源于38个厂家共含氢基团（OH、

NH、CH）振动的合频和各级倍频的吸收区一致，40批次。

通过扫描样品的近红外光谱，可以得到样品中有机分子含氢基1.2 方法 团的特征信息，进而检测出样品中的水分含量。

以《中国药典》

内的中成药硬胶囊的水分值作为参考值，以随着红外仪器技术的发展，更加稳定的电源、信号放大器、80份中成药硬胶囊作为样品，将其随机分为4组，分别用烘干更灵敏的光子探测器、微型计算机等，使得近红外光谱区作为一法、甲苯法、减压干燥法及近红外光谱方法进行水分测定，进而段的且有独特信息特征的谱区得到了重视。近红外光谱方

比较4种方法的测定效果。

法具有以下特点[3]：

①振动频率大于2 000 cm-1；②近红外谱区烘干法是指将样品放在已知重量的称皿中，放入烘箱内约还包含其他的合频吸收，信息丰富；③信息强度强于中红外区或8 h后取出，冷却20 min后称重，重复烘3 h后，进行冷却再称紫外可见区；④近红外谱区信息品质高于中红外谱区等；⑤分析重，最后计算丢失的水分含量。甲苯法是指通过测定样品在甲速度快、对样品无化学污染、仪器操作和维护简单、测量精度高、苯加热回流条件下被蒸馏出的水量，根据水量和取样计算样品分析成本低。

的含水量的方法。减压干燥法是指在密闭容器中抽真空后进行近红外光谱技术不仅具有快速、方便、准确、非侵入式分析、干燥的方法。近红外光谱方法是指对样品进行校正、验证后，易于实现生产过程的在线控制等优点，而且可以鉴定某些药物用一阶导数处理校正集样品光谱数据并利用偏最小二乘法建立如光学异构体、具有光学活性物质的纯度，因此在药物的定性鉴校正模型。在光纤波12 000～4 000 cm-1波长内直接扫描硬胶定、定量分析、质量控制及在线检测等方面显示了巨大的作用。囊，扫描次，其分辨率为8 cm-1；在每批硬胶囊中随机抽取6本文中为分析近红外光谱方法对中成药硬胶囊水分的测定效粒，每粒按上述方法扫描1次后，计算其平均光谱。

果，将80份中成药硬胶囊样品随机分为4组，分别用烘干法、甲1.3统计处理

苯法、减压干燥法及近红外光谱方法测定其水分。结果得出，4数据采用SPSS17.0软件进行统计和分析，计量资料采用t种方法的水分测定结果差异无统计学意义，其中近红外光谱方检验，P＜0.05表明差异具有统计学意义。2 结果

法的测定时间短于其他3种方法。因此，近红外光谱方法对于中成药硬胶囊水分的快速测定具有重要意义。比较4组中成药硬胶囊样品分别经烘干法、甲苯法、减压干

参考文献

表1：比较4种水分测定方法的测定结果

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