肝细胞癌患者癌组织miRNA-30c水平变化及其临床意义探讨

实用肝脏病杂志圆园19年3月第22卷第2期JPracHepatol，Mar.2019.Vol.22No.2

·肝癌·

肝细胞癌患者癌组织miRNA-30c水平变化及其临床意义探讨*

王虎明，樊东升，徐杰，刘险峰，周宁，丽敏，包娜娜

【摘要】目的关系。方法

探讨肝细胞癌（HCC）患者癌组织微小RNA（miRNA）-30c（miRNA-30c）水平变化及其与预后的

2010年2月~2012年11月我院收治的HCC患者35例，经外科手术切除肿瘤获得癌组织标本。采用

RT-PCR法检测癌组织miRNA-30c相对水平。不同临床和病理因素患者癌组织miRNA-30c水平高低的风险比（OR）和95%可信区间（CI）采用Logistic二项回归分析。采用Kaplan-Meier最小乘积法评价患者的生存率，不同miRNA-30c水平患者生存率的差异比较采用Log-Rank检验。结果

35例HCC患者癌组织miRNA-30c相对水平

为0.6,95%CI为0.3~0.6，其中癌组织miRNA-30c相对水平低于0.6者13例，大于0.6者22例；不同性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、TNM分期、有无肝炎病史和血清甲胎蛋白（AFP）水平高低患者癌组织miRNA-30c水平差异无统计学意义（P＞0.05），但17例存在淋巴结转移患者癌组织miRNA-30c水平为（0.2±0.0），显著低于18例无淋巴结转移患者【（0.8±0.1），P<0.05】；调整后的风险比（OR）=5.4,95%CI：1.2~20.1；癌组织miRNA-30c高水平患者总生存期为（14.5±6.7）个月，95%CI为11.0~28.4个月，显著长于低水平患者【（7.9±1.5）个月，95%CI为3.2~10.7个月，P<0.05】。结论

本研究结果表明，HCC患者癌组织miRNA-30c相对水平与患者预后有关，其是否可作为潜在的

PLC诊断和预后判断的生物学标志物还需进一步研究。

【关键词】肝细胞癌；微小RNA；病理学；预后DOI：10.3969/j.issn.1672-5069.2019.02.024

CancerousmiRNA-30clevelsaffectingthesurvivalofpatientswithhepatocellularcarcinomaafterhepatectomy

WangHuming，FanDongsheng，XuJie，etal.ClinicalLaboratory，TumorHospital，Baotou014030，

ToinvestigatetherelationshipbetweencancerousmiRNA-30clevelsandthesurvival

InnerMongoliaAutonomousRegion，China

ofpatientswithhepatocellularcaicinoma（HCC）afterhepatectomy.Methods

【Abstract】Objective

Thirty-fivepatientswithHCCin

ourhospitalbetweenFebruary2010andNovember2012wereincludedinthisstudy.Allpatientswereconfirmedtitativepolymerasechainreaction.CancerousmiRNA-30clevelswerecomparedbetweenpatientswithdifferentclinicalandpathologicalfeatures.ThesurvivalrateofpatientswasevaluatedbytheKaplan-Meierminimumproductmethod，andthedifferenceofsurvivalratewasevaluatedbyLog-Ranktest.Results

cancerousmiRNA-30cinthe35patientswithHCCwas0.6，with95%CIof0.3to0.6，andtherewere13pa原

bypathologicalexaminationafterhepatectomy，andcancerousmiRNA-30clevelswereassayedbyreal-timequan原

Therelativelevelof

tientsswithlowcancerousmiRNA-30clevellessthan0.6and22patientswithhighcancerousmiRNA-30clev原elsgreaterthan0.6；therewerenosignificantdifferencesofcancerousmiRNA-30clevelsbetweenpatientswithlevels（P>0.05），however，thecancerousmiRNA-30clevelsin17patientswithlymphnodemetastasiswas（0.2依0.0），significantlylowerthan【（0.8依0.1），P<0.05】in18patientswithoutlymphnodematastasis；theadjustedriskdiffenrentgender，age，tumorsize，degreeofdifferentiation，TNMstaging，historyofviralhepatitis，andserumAFPratio（OR）=5.4，and95%CI:1.2to20.1；thetotalsurvivalinpatientswithhighcancerousmiRNA-30clevelswas

0.05】inpatientswithlowercancerousmiRNA-30clevels.Conclusion

Ourfindingsindicatethatthe

（14.5依6.7）m，with95%CIof11.0-28.4m，significantlylongerthan【（7.9依1.5）m，with95%CIof3.2-10.7m，P<

*基金项目：内蒙古自治区自然科学基金资助项目（编号：2016WS08100）

作者单位：014030内蒙古自治区包头市肿瘤医院检验科（王虎明，周宁，丽敏，包娜娜）；外科(徐杰，刘险峰)；内蒙古医科大学第二附属医院外科（樊东升）

第一作者：王虎明，男，49岁，医学硕士，副主任医师。主要从事肝胆胰肿瘤诊治研究。E-mail:chan1429@foxmail.com

通讯作者：刘险峰，E-mail:chan1429@foxmail.com

cancerousmiRNA-30clevelisrelatedtotheprognosisofpatientswithhepatocellularcarcinoma，anditmightvivalofpatientswithhepatocellularcarcinomaafterhepatectomy.

beanewpotentialbiomarkerforpredictingthesur原

RNA；Pathology；Prognosis

【Keywords】Hepatocellularcarcinoma；micro

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·249·

微小RNA（miRNA）是一类长度为12~23个核苷酸的内源性小分子RNA[2-4]。miRNA-155可以通过调

节SOX6信号通路，促进PLC的侵袭[5，6]。miRNA-520

和miRNA-99a可以作用于细胞周期蛋白，进而抑

制PLC的生长[7，8]。本研究分析了PLC患者肝癌组织

miRNA-30c水平变化与病理学指标的关系及其对患者预后的影响，现将结果报道如下。1资料与方法1.1

一般资料

2010年2月2012年11月我院收

治的PLC患者35例，男性21例，女性14例；年龄49~68岁，平均年龄（55.2±3.7）岁。所有患者均经过组织病理学检查诊断为肝细胞癌（HCC）。术前未经过放化疗治疗。本研究已经过我院医学伦理委员会批准，患者签署知情同意书。1.2肝组织miRNA-30c检测

将切除的癌组织立

即用冰PBS缓冲液冲洗，剪至黄豆粒大小后，放入液氮中冷冻，过夜后置入-70℃冰箱中保存、待测。采用RNA提取试剂盒（南昌乐悠生物科技有限公司）提取RNA。采用TaqManmiRNA反转录试剂盒南昌乐悠生物科技有限公司），即实时定量聚合酶链式反应法检测成熟体miRN-30c水平。将RUN6作为内参进行检测。miRN-30c和RUN6引物序列均由深圳市华安平康生物科技有限公司设计合成。本2实验采用两步法检测miRN-30c水平。采用公式ct-吟ct计算miRNA-30c相对水平，即吟ct=ctmiRNA-30cRUN6。

-1.3统计学方法

应用SPSS19.0软件进行统计学

分析，计量资料以（x依s）表示，采用t检验，癌组织miRNA-30c水平与临床和病理因素的风险比（OR）和95%可信区间（CI）采用Logistic二项回归分析。采用Kaplan-Meier最小乘积法评价患者的生存率，不同miRNA-30c水平患者生存率的差异比较采用Log-Rank检验。P＜0.05被认为差异有统计学意义。2结果

2.1不同临床和病理学因素HCC患者肝组织miRNA-30c水平比较

不同性别、年龄、肿瘤大小、

分化程度、TNM分期、有无肝炎病史和血清AFP水平高低患者肝组织miRNA-30c水平差异无显著性统计学意义（P＞0.05），但有淋巴结转移患者肝组织miRNA-30c水平显著低于无淋巴结转移者，差异有统计学意义（P＜0.05，表1）。

表1不同临床和病理学因素患者肝组织miRNA-30c

水平（x依s）比较

例数

miRNA-30cP性别男210.5±0.1＞0.05

女

140.6±0.0年龄(岁)≥50140.5±0.1＞0.05＜50

210.5±0.1肿瘤大小(cm)≥3220.6±0.0＞0.05＜3

130.5±0.0分化低分化120.6±0.0＞0.05中/高分化

230.6±0.1TNM分期Ⅰ/Ⅱ120.5±0.1＞0.05Ⅲ/Ⅳ

230.6±0.0淋巴结转移是170.2±0.0＜0.05否

180.8±0.1肝炎病史有250.6±0.0＞0.05无

100.6±0.1AFP(μg/L)≥25260.6±0.2＞0.05＜25

9

0.6±0.2

2.2肝组织miRNA-30c水平的进一步回归分析35例HCC患者癌组织miRNA-30c相对水平为0.6,95%CI为0.3~0.6，其中癌组织miRNA-30c相对水平低于0.6者13例，大于0.6者22例。经Logistic二项回归分析发现，不同性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、TNM分期、有无肝炎病史和血清AFP水平高低者癌组织miRNA-30c相对水平无显著性差异P＞0.05），而有淋巴结转移者癌组织miRNA-30c水平显著降低（P＜0.05，表2）。

2.3不同miRNA-30c水平患者生存比较

癌组织

miRNA-30c高水平患者总生存期为（14.5±6.7）个月，95%CI为11.0~28.4个月，显著长于低水平患者（7.9±1.5）个月，95%CI为3.2~10.7个月，P<0.05，图1】。

图1两组生存曲线比较

（（【·250·

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表2Logistic二项回归分析不同临床和病理学因素患者癌组织miRNA-30c水平差异

OR（95%CI）

性别年龄（岁）肿瘤大小（cm）分化程度TNM分期淋巴结转移肝炎病史血清AFP（μg/L）

男女≥50＜50≥3＜3低分化中/分化Ⅰ/ⅡⅢ/Ⅳ是否有无≥25＜25

1.00.9（0.33.0）

1.01.2（0.33.1）

1.01.8（1.03.7）

1.01.4（0.34.5）

1.02.1（0.96.2）

1.03.9（1.012.5）

1.01.1（0.22.5）

1.01.0（1.01.9）

＞0.05＞0.05＜0.05＞0.05＞0.05＞0.05＞0.05P＞0.05

矫正OR（95%CI）

1.00.5（0.82.5）

1.00.9（0.23.1）

1.02.9（0.69.7）

1.01.6（0.45.0）

1.02.6（0.66.1）

1.05.4（1.220.1）

1.01.3（0.73.7）

1.01.3（0.82.4）

＞0.05跃0.05约0.05＞0.05＞0.05＞0.05＞0.05P＞0.05

3讨论

常见的恶性肿瘤，其死亡率在男性中为第2位，在女性中为第6位[11]。PLC是恶性程度高、易转移和预后较差的一种肿瘤。由于缺乏特异性的生物学指

PLC已成为全世界男性第五位、女性第7位最

本研究发现，不同性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、TNM分期、有无肝炎病史和血清AFP水平高

低PLC患者癌组织miRNA-30c相对水平无显著性差异（P>0.05），但是，存在淋巴结转移患者癌组织miRNA-30c水平显著低于无淋巴结转移者，差异有统计学意义（P<0.05）。进一步地经Logistic二项回归分析发现，miRNA-30c低水平增加了淋巴结转移的风险。研究结果可能暗示，癌组织miRNA-30c水平的高低对于诊断有无淋巴结转移的PLC患者有参考价值，需要今后进一步地进行研究。由于本组例数较少，还未能发现肿瘤分化程度、组织浸润和肿瘤大小等因素对癌组织miRNA-30c相对水平的影响。在临床实际工作中，还难以对各种影响因素进行精准的判定。由于我国HCC多发生在具有乙型肝炎肝硬化的患者，病毒因素肯定影响患者预后，而这些是否会影响癌组织miRNA-30c水平，均需要进一步研究。

miRNA-30c属于miRNA-30家族成员。以往研究已证实，miRNA-30c与肺癌、乳腺癌、肾癌等有

16，17]

关[10，。但是，关于其与PLC的关系，则研究较少。现在看来，miRNA-30c对于PLC的诊断有重要的应用价值。有学者发现miRNA-30c诊断PLC的受试者工作特征曲线（ROC）下面积（AUC）为0.927，其诊断的灵敏度和特异度分别为81.84%和71.80%，与

标，使得早期诊断变得较为困难[12]。部分患者在确诊时已经发生浸润或转移，从而失去了最佳的治疗时机。因此，深入地研究PLC的发病机制，对于早期诊治有重大的意义。自Leeetal首次发现Lin-4以来，已经有上千种miRNA在动植物体内被发现[13]。miRNA通过与目标碱基的配对，从而对靶基因的表miRNA表达谱与PLC的病理学类型、恶性程度、分的发育有重要的作用

[14]达进行，对于细胞的分化、增殖、凋亡和对机体

。近年来，大量研究表明

级和分期等临床病理学特征密切相关，检测miRNA不仅可以优化PLC的诊断和个体化治疗，而且还能作为判断PLC预后的工具[15]。例如，miRNA-423可以抑制抑癌基因的表达，从而促进PLC的形成[5]；

miRNA-155可以通过调节SOX6信号通路，促进

8]作用于细胞周期蛋白，进而抑制PLC的生长[7，。既往研究发现miRNA-30c可作为抑癌基因在肿瘤的

PLC的侵袭[6]，而miRNA-520和miRNA-99a可以

30c水平与PLC患者的预后有关。

发生和发展中扮演重要角色[9]。本研究发现，miRNA-

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miRNA-203联合诊断可将ROC曲线下面积提高至0.9378，诊断的灵敏度和特异度提高至84.51%和80.33%[18]。既往研究还发现，miRNA-30c可以下调转移相关基因1（MTA1）来肿瘤细胞的增殖，其与核转录因子HMBOX1的3’端非翻译区结合，使自然杀伤细胞的肿瘤坏死因子（TNF）-α表达水平增高，进而增加机体对PLC细胞的杀伤能力[19]。研究发现miRNA-30c在PLC组织中表达下调。在体外实验Snail中，通过水平上，调进一miRNA-30c步降低了PLC的表细胞达可以的侵袭抑制性转录因子[20]。

还有研究发现miRNA-30c-5p对机体脂肪酸的合成有重

要作用，可用以治疗瘦素受体缺陷小鼠的甘油三酯

堆积和肝脂肪变性[21，

22]。本研究以癌组织miRNA-30c的平均水平为分界线，将患者分为低水平组和高水平组。结果表明，癌组织miRNA-30c高水平组患者0.05总生存期显著长于低水平组，差异有统计学意义（P<

示PLC），提患示检者术测后癌预组织后的作用。

miRNA-30c水平可能具有预参考文献】

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（收稿：2018-05-22）（本文编辑：陈从新）

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